1996 Fiscal Year Annual Research Report

金微粒子をキャリアーとした外来遺伝子の細胞内導入の研究

Research Project

Project/Area Number	08878112
Research Institution	Nagoya City University
Principal Investigator	中西守名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (90090472)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	古野忠秀名古屋市立大学, 薬学部, 助手 (80254308)
Keywords	遺伝子導入 / 外来遺伝子 / プラスミド / ルシフェラーゼ / 金粒子 / アンチセンス / 共焦点レーザ顕微鏡 / CAT遺伝子
Research Abstract	遺伝子治療は遺伝病の根元的治療法になるだけでなく、癌やエイズの治療にも有効であると期待されている。しかし、遺伝子治療の臨床応用での成功例はあるものの、その基盤となる基礎研究は著しく立ち遅れており、多くの解決しなければならない問題をかかえている。その一つは安全性が高くて、効率のよい外来遺伝子の細胞内導入法の確立である。そこで、本研究では外来遺伝子の細胞内導入のキャリアーとしての金粒子の利用について検討した。まず、プラスミド遺伝子の調製を行った。そして、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子(CAT遺伝子)、ならびに、ルシフェラーゼ遺伝子を持ったプラスミドDNAの大量培養とこれらプラスミド遺伝子の分離精製に成功した。また、導入した遺伝子の細胞内動態を追究するため、蛍光標識したc-mycアンチセンスDNAの合成を行い、フルオロセンイ標識したc-mycアンチセンスDNAを作製した。そこで、作製した遺伝子の細胞内導入後の活性測定法を確立するため、正電荷リポソームを用いて培養細胞にこれら2種類のプラスミド遺伝子とアンチセンスDNAを導入し、CAT遺伝子ならびにルシフェラーゼ遺伝子の発現を検討した。特に、ルシフェラーゼ遺伝子のルミノメータによる微量定量法の確立を行った。また、蛍光標識アンチセンスDNAについては共焦点レーザ顕微鏡ならびにフローサイトメータを用いた蛍光強度による導入遺伝子の定量法を検討した。これらの実験と並行して、金微粒子を用いたDNAとの複合体の調製法についても種々の検討を加え、金微粒子をキャリアーとした外来遺伝子の細胞内導入技術の開発について種々検討を加えた。これの研究成果は外来遺伝子のキャリアーの開発の次年度の研究の進展に大きく寄与するものと考えられた。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] K. Takeuchi: "Effect of zeta potential of cationic liposomes containing cationic cholesterol derivatives on gene transfection." FEBS Lett.397. 207-209 (1996)
[Publications] T. Furuno: "Surface expressin of CD63 antigen (AD1 antigen) in P815 cells by transfected IgE receptors." Biochem. Biophys. Res. Commun.219. 740-744 (1996)
[Publications] T. Okabe: "Confocal fluorescence microscopy for antibodies against a hightly conserved sequence in SH2 domains." Biochem. Biophys. Res. Commun.223. 245-249 (1996)
[Publications] C. Torigoe: "Quantitative and realtime correlation between receptor aggregation and intracellular calcium signal transduction" Immunol. Lett.49. 169-174 (1996)
[Publications] M. Sumida: "Accumulation of photoporphyrinogen IX induced by acifluorfen methyl." Verlag Zeit. Naturforshung. 174-178 (1996)
[Publications] N. Ohyama: "Crossbridge rigidity effects differently on mIgM and IgE receptor-mediated calcium signals." Bioimages. 4. 191-192 (1996)
[Publications] 中西守: "実験医学別冊" 羊土社, 202 (1996)
[Publications] 中西守: "新タンパク質応用工学" フジ・テクノシステム, 950 (1996)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

金微粒子をキャリアーとした外来遺伝子の細胞内導入の研究

Principal Investigator

中西 守 名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (90090472)

Research Products

[Publications] K. Takeuchi: "Effect of zeta potential of cationic liposomes containing cationic cholesterol derivatives on gene transfection." FEBS Lett.397. 207-209 (1996)

[Publications] T. Furuno: "Surface expressin of CD63 antigen (AD1 antigen) in P815 cells by transfected IgE receptors." Biochem. Biophys. Res. Commun.219. 740-744 (1996)

[Publications] T. Okabe: "Confocal fluorescence microscopy for antibodies against a hightly conserved sequence in SH2 domains." Biochem. Biophys. Res. Commun.223. 245-249 (1996)

[Publications] C. Torigoe: "Quantitative and realtime correlation between receptor aggregation and intracellular calcium signal transduction" Immunol. Lett.49. 169-174 (1996)

[Publications] M. Sumida: "Accumulation of photoporphyrinogen IX induced by acifluorfen methyl." Verlag Zeit. Naturforshung. 174-178 (1996)

[Publications] N. Ohyama: "Crossbridge rigidity effects differently on mIgM and IgE receptor-mediated calcium signals." Bioimages. 4. 191-192 (1996)

[Publications] 中西 守: "実験医学別冊" 羊土社, 202 (1996)

[Publications] 中西 守: "新タンパク質応用工学" フジ・テクノシステム, 950 (1996)

中西守名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (90090472)

[Publications] 中西守: "実験医学別冊" 羊土社, 202 (1996)

[Publications] 中西守: "新タンパク質応用工学" フジ・テクノシステム, 950 (1996)