2008 Fiscal Year Annual Research Report
特定のオルガネラのみで機能するケージド化合物の創製とその生物応用
Project/Area Number |
08J07344
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Research Institution | Nagoya University |
Principal Investigator |
神谷 真子 Nagoya University, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(SPD)
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Keywords | 蛍光プローブ / ケージド化合物 / 蛋白ラベル化 / カルシウムイオン |
Research Abstract |
1.本年度の年次計画に従い、スイス・ローザンヌ・EPFL大学のKai Johnsson博士の研究室を訪れ、hAGT(SNAP-tag)がある空間でのみ機能する高性能な小分子の開発に取り組んだ。具体的には、まずBODIPY骨格を基本蛍光骨格として選択し、Ca^<2+>キレート部位であるBAPTA(1,2-bis(o-aminophenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid)を付与することで、新たなCa^<2+>蛍光プローブ(BAPTA-BDPpH)を開発した。この蛍光特性を精査した結果、Ca^<2+>添加により250倍もの蛍光強度上昇を示し、既存のプローブでは成し得ない大きなシグナル変化が得られることを示しか。今後、SNAP-tagとの反応部位であるbenzylguanineをこのプローブに組み込んだ化合物を合成し、SNAP-tagとのラベル化後における蛍光特性の変化、生細胞内における局在性及びCa^<2+>応答性を検討していく。 2.SNAP-tagと、benzylguanine-caged fluorophore(SNAP-tagとの反応部位を有し、光照射により蛍光を回復する分子)とを組み合わせることで、真核生物のモデル実験動物として汎用されているzebrafishの細胞系譜を調べる手法の確立に取り組んだ。具体的には、histone-SNAPのRNAと、東京大学大学院薬学系研究科・長野研究室で開発されたBGDN BBDP-p^Hを卵にマイクロインジェクションし、さらに光照射を行うことで光照射した細胞の核においてのみ蛍光強度回復が起こることを示した。今後単一細胞レベルで光照射を行い、回復した蛍光を追跡することで、その細胞の系譜等を検討していく。
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Research Products
(3 results)