2009 Fiscal Year Annual Research Report
がん関連糖鎖抗原に対する単鎖抗体の作製とその診断への応用
Project/Area Number |
08J40063
|
Research Institution | Tokai University |
Principal Investigator |
高崎 綾乃 Tokai University, 工学部, 特別研究員(RPD)
|
Keywords | ファージライブラリー / 単鎖抗体 / T抗原 / マンノトリオース / がん関連糖鎖抗原 |
Research Abstract |
<内容>ファージライブラリー法を駆使し、がん関連糖鎖抗原を標的とした単鎖抗体を得ることを目的として、これまで得られたいくつかの糖鎖特異的単鎖抗体をT7プロモーター系で発現させ、大腸菌体内に不溶化して蓄積する封入体画分を回収した。この封入体をグアニジン塩酸条件化で変性させ、アフィニティークロマトグラフィーで精製後、ステップワイズ透析によりリフォールディングを行った。その結果、抗M3単鎖抗体クローン、抗T抗原単鎖抗体クローンについて活性をもつ単鎖抗体の大量調製に成功した。これらの単鎖抗体の診断薬・治療薬の開発への応用を目指し、乳がん細胞の増殖抑制テストを行い、その有効性を調べている。 <意義>生体では免疫寛容により得られ難い糖鎖抗原に対して、ファージライブラリー法ではそのような制約がない。今回、申請者は、T抗原およびマンノトリオースを認識する単鎖抗体クローンの大量調製に成功した。この方法を用いれば、これまで糖鎖をターゲットとした抗体作製が哺乳動物細胞では得られ難かったのに対し、糖鎖構造特異的単鎖抗体を大量に調製できると考えられる。特に今後診断薬や治療薬への応用を試みるためには、単鎖抗体の大量調製は必須である。 <重要性>糖鎖生合成のある系での抗糖鎖抗体の発現は、その宿主の生育に影響を及ぼす可能性が高い。糖鎖を生合成しない大腸菌による大量調製法を見出したことは抗糖鎖抗体を得るにあたり非常に有意義である。
|
Research Products
(4 results)