1997 Fiscal Year Annual Research Report

細胞障害性ストレスに対する心筋細胞の防御およびその破綻の分子機構に関する研究

Research Project

Project/Area Number	09470161
Research Institution	Gunma University
Principal Investigator	倉林正彦群馬大学, 医学部, 講師 (00215047)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	世古義規東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (30240708)
Keywords	Mn-SOD / 酸化ストレス / サイトカイン / プロモーター / NFkB / Sp1 / 転写因子 / BTEB2
Research Abstract	【目的】スーパーオキサイドを過酸化水素に変換するsuperoxide desmutase(SOD)はミトコンドリア内に生ずる活性酸素種を除去し、酸化ストレスから細胞を保護する重要な酵素である。Mn-SODはTNAFa,IL-1bなどの炎症性サイトカインやリポ多糖類、フォルボールエステルなどにより発現が増加する。この機構を明らかにする目的でMn-SOD遺伝子をクローニングし、プロモーター機能を解析した。【方法】ヒトMn-SODcDNAをプローブとしてヒト遺伝子ライブラリーをスクリーニングした。得られた陽性クローンの塩基配列を決定し、プロモーター領域を1.5kb含むDNA断片をルシフェラーゼベクターに挿入した。このMn-SOD-ルシフェラーゼ発現にベクターを各種転写因子の発現ベクターとともに培養ウシ肺動脈内皮細胞(CPAE)にコトランスフェクトし、ルセフェラーゼアッセイを行った。また、Mn-SOD-ルシフェラーゼの5'-欠失ミュータントを作成した。【結果】転写開始点から1.4kbを含むMn-SODプロモーター活性は、CPAE中で非常に強い活性を示した。転写開始点から-120〜-70を欠失することによりルシフェラーゼ活性は著明に活性が低下した。この領域中にはGCボックスが2個存在した。Mn-SODプロモーターはSp1,BTEB2とのコトランスフェクションにより著明に活性が増加した。フォルボールエステルPMA(100ng/ml)の添加によりMn-SODプロモーター活性は明らかに増加した。-70までの欠失にてPMAの効果はほとんど消失した。NFkBp65はMn-SODプロモーター活性を変化させなかった。【総括】Mn-SODプロモーターの構成的な活性はSp1とGCボックスによること、PMAによる誘導にSp1が関与していることが明らかとなった。

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Manabe I.et.al.: "Isolation of the embryonic form of smooth musde myos'n heavy chain(SMemb/NMHC-B)gene and characterization of its 5'flanking region" Biochem.Biophys Res.Commun. 239. 598-605 (1997)
[Publications] Kuro-o M.et.al.: "Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing" Nature. 390. 45-51 (1997)
[Publications] Kurabayashi M.et al: "Downregulation of angiotensin II receptor type I in heart failure" Circulation. 95. 1104-1107 (1997)
[Publications] Suzuki T.et.al: "A novel biochemical method for aortic dissection" Cirulation. 93. 1244-1249 (1996)
[Publications] Suzuki T.et.al.: "Preferential differentiation of P19 mouse embryonal carcinsma cells into smooth muscle cells" Circ.Res.78. 395-404 (1996)
[Publications] Watanabe M.et.al.: "Structure and characterization of the 5'flanking region of the mouse smooth muscle myosin heavy cha'n SM1/2 gene." Circ.Res.78. 978-989 (1996)
[Publications] 倉林正彦: "心臓にやさしい心不全治療" 診断と治療社, 11 (1997)
[Publications] 倉林正彦: "慢性心不全の新しい視点" ライフサイエンスメディカ, 7 (1997)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

細胞障害性ストレスに対する心筋細胞の防御およびその破綻の分子機構に関する研究

Principal Investigator

倉林 正彦 群馬大学, 医学部, 講師 (00215047)

Research Products

[Publications] Manabe I.et.al.: "Isolation of the embryonic form of smooth musde myos'n heavy chain(SMemb/NMHC-B)gene and characterization of its 5'flanking region" Biochem.Biophys Res.Commun. 239. 598-605 (1997)

[Publications] Kuro-o M.et.al.: "Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing" Nature. 390. 45-51 (1997)

[Publications] Kurabayashi M.et al: "Downregulation of angiotensin II receptor type I in heart failure" Circulation. 95. 1104-1107 (1997)

[Publications] Suzuki T.et.al: "A novel biochemical method for aortic dissection" Cirulation. 93. 1244-1249 (1996)

[Publications] Suzuki T.et.al.: "Preferential differentiation of P19 mouse embryonal carcinsma cells into smooth muscle cells" Circ.Res.78. 395-404 (1996)

[Publications] Watanabe M.et.al.: "Structure and characterization of the 5'flanking region of the mouse smooth muscle myosin heavy cha'n SM1/2 gene." Circ.Res.78. 978-989 (1996)

[Publications] 倉林正彦: "心臓にやさしい心不全治療" 診断と治療社, 11 (1997)

[Publications] 倉林正彦: "慢性心不全の新しい視点" ライフサイエンスメディカ, 7 (1997)

倉林正彦群馬大学, 医学部, 講師 (00215047)