1998 Fiscal Year Annual Research Report
RecQファミリータンパク質を中心にしたDNA組み換え、癌化・老化の基礎研究
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09470498
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
榎本 武美 東北大学, 薬学部, 教授 (80107383)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
益子 高 東北大学, 薬学部, 助教授 (30157200)
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| Keywords | RecQタンパク質 / DNAヘリカーゼQ1 / ブルーム症候群 / 癌化 / 老化 / DNAトポイソメラーゼIII / Rad18 |
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| Research Abstract |
本研究は、RecQファミリーへリカーゼを中心にして、高等真核細胞とともに出芽酵母を使って解析し、これらのヘリカーゼの関与するDNA複製、修復、組み換え、染色体構造形成の分子メカニズムの解明をめざした。
1. マウスの相同遺伝子のクローニングと発現の解析
マウスのDNAヘリカーゼQ1(Q1)、ブルーム症候群原因遺伝子(BLM)及び、RecQタンパク質と相互作用する可能性が示唆されているDNAトポイソメラーゼIIIのcDNA(TOP3)をクローニングし、Q1及びTOP3の新しい遺伝子、Q1β及びTOP3βを発見した。これらのcDNAを用いてマウスの種々の臓器で、Q1、BLM、TOP3のmRNAの発現を調べたところ、精巣で特に高い発現が観察され、精子形成にともないDNAの組み換えが起こる時期に発現が上昇することがわかった。
2. two-hybrid系による相互作用するタンパク質の遺伝子のクローニング
酵母のtwo-hybrid系をもちいてWmと相互作用するタンパク質(Werner interacting protein 1)をコードする新規な遺伝子WIP1をクローニングした。さらにトポIIIαと相互作用するタンパク質をコードする遺伝子の検索により、分裂酵母rad18の高等真核細胞相同遺伝子をクローニングした。Rad18タンパク質は、染色体の凝集に関与するコンデンシンや、姉妹染色体を結合させるコヘッシンと相同性の高いタンパク質である。
3. 出芽酵母をもちいた解析
RecQの酵母の相同遺伝子SGS1を破壊すると姉妹染色分体交換の頻度の上昇が観察された。また、この破壊株では胞子形成能が低下したが、解析の結果、Sgs1は組み換えそのものには直接関与していないことがわかった。また、SGS1遺伝子と他の遺伝子の二重破壊株を作製して解析した結果、Sgs1はRad53やMec1が関与する過程で働くことが示唆された。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Takahiko Seki: "Isolation of a cDNA encoding mouse DNA topoisomerase III which is highly expressed at the mRNA level in the testis." Biochim.Biophys.Acta. 1396. 127-131 (1998)
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[Publications] Takahiko Seki: "cDNA cloning of mouse BLM gene,the homologue to human Bloom's syndrome gene,which is highly expressed in the testis at the mRNA level." Biochim.Biophys.Acta. 1398. 377-381 (1998)
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[Publications] Takahiko Seki: "Cloning of cDNA encoding a novel mouse DNA topoisomerase III(Topo IIIβ)possessing negatively supercoiled DNA relaxing activity,whose message is highly expressed in the testis." Journal of Biological Chemistry. 273. 28553-28556 (1998)
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[Publications] Wen-Sheng Wang: "Cloning of two isoforms of mouse DNA helicase Q1/RecQL cDNA:α from is expressed ubiquitously and β form specifically in the testis." Biochim.Biophys.Acta. 1443. 198-202 (1998)
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[Publications] Miwa Siratori: "Detection by epitope-defined monoclonal antibodies of Werner DNA helicases in nucleoplasm and their upregulation by cell transformation and immortalization." Journal of Cell Biology. 144. 1-9 (1999)
