1998 Fiscal Year Annual Research Report
アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターを用いた尿素サイクル異常症の遺伝子治療研究
Project/Area Number |
09470520
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Research Institution | Kumamoto University |
Principal Investigator |
松田 一郎 熊本大学, 医学部, 名誉教授 (10000986)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
島田 隆 日本医科大学, 教授 (20125074)
遠藤 文夫 熊本大学, 医学部, 教授 (00176801)
山本 哲郎 熊本大学, 医学部, 教授 (60112405)
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Keywords | 遺伝子治療 / ベクター / OTC欠損症 / AAVベクター |
Research Abstract |
アデノ随伴ウイルス(以下AAV)はヒトパルボウイルスの一種で約4.7kbの1本鎖DNAのゲノムを持ち、ウイルスの複製の調節に関わっていろり遺伝子と構造蛋白をコードしているcap遺伝子からなる。このウイルスは感染後、ヒト19番染色体S1部位に組み込まれることが分かっている。大きな特色は非分裂細胞にも感染可能で、また感染細胞のゲノムにintegrateされることである。 人の先天代謝異常症に対する遺伝子治療にウイルスベクターの使用を考えるとき、アデノウイルスベクターではその効果が一過性であり、またはレトロウルスでは分裂細胞にのみ導入可能なのに対し、AAVでは非分裂性の標的細胞のゲノムに導入され、効果が長期に及ぶことが期待される。そこで、尿素サイクルの酵素の一つであるオルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)とチロシン分解酵素のフマリルアセト酢酸水酸化酵素(FAH)の欠損症に対する遺伝子治療にむけてAAVベクターの作製を試みた。組換えAAVの作製にあたり、両端のITRだけを残しrepとcapを取り除き、ヒトOTCとヒトFAHのcDNAをそれぞれ組み込んだvector plasmidを作製した。このvector plasmidを1μgと、repとcapを組み込み、両端のITRを取り除いたhelper plasmidをそれぞれ10μgずつ7×10^6のHeLa細胞にtransfectさせ、G418を用いてselectionし約10^4cfu/mlの組換えAAV/FAHベクターを産生するpackaging cell lineを作製した。 現在、さらに感染効率を上げるために、硫酸アンモニウムと塩化セシウムを用いた濃縮法を試みている。高濃度のAAVウイルスを用いてさらに先天代謝異常症の遺伝子治療実験をすすめている。
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Research Products
(18 results)
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[Publications] Shimizu M.: "Ten novel mutations of the ornithine transcarbamylase(OTC)gene in OTC deficiency." Hum Mutation,Supp. 1. 5-7 (1998)
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[Publications] Nishiyori A.: "Y55D mutation in ornithine transcarbamylase associated with late-onest hyperammonemia in a male." Hum Mutant Suppl. 1. 131-133 (1998)
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[Publications] Watanabe A.: "Prenatal diagnosis of ornithine transcarbamylase dificiency by using a single nucleated erythrocyte from maternal blood." Hum Genet. 102. 611-615 (1998)
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[Publications] Yorifuji T.: "X-inactivation pattern in the liver of a manifesting female with ornithine transcarbamylase(OTC)deficiency." Clin Genet. 54. 349-353 (1998)
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[Publications] Komaki S.: "The polymorphic 43Thr bcl-2 protein confers relative resistance autoimmnity:an analytical evaluation." Hum Genet. 103. 435-440 (1998)
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[Publications] Kubo S.: "Hepatocyte injury in tyrosinemia type 1 is induced by fumarylacetate and is inhibited by xaspase inhibitors." Proc Natl Acad Sci. 95. 9552-9557 (1998)
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[Publications] Nagano K.: "Intracellular distribution of Wilson's disease gene product(ATPase7B)after in vitro and in vivo exogenous expression in hepatocytes from the LEC rat,an animal model of Wilson's disease." Hepatology. 27. 799-807 (1998)
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[Publications] Uchino T.: "Neurodevelopmental outcome of long-term therapy of urea cycle disorders in Japan." J Inherit metabol disease. 21. 151-159 (1998)
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[Publications] Goseki-Sone M.: "Hypophosphatasia:identification of five novel missense mutations in the tissue-nonspecific alkaline phosphatase gene among Japanese patients.Hum." Mutat.Suppl. 1. 263-267 (1998)
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[Publications] Tanosaki,S.: "Relationship of microsatellite instebility to N-ras mutation and duration of disease-free survivial in acute leukemia." Cancer. 83. 475-481 (1998)
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[Publications] Miyake,K.: "Stable integration of HIV-retrovial vectors into the chromosomes of non-dividing cells." Hum.Gene.Ther.9. 467-475 (1998)
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[Publications] Matsuoka,H.: "An improved methods of HIV vector mediated gene trasnfer." Inter.J.Hematol.67. 267-273 (1998)
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[Publications] Orimo,H.: "A novel missense mutation and frameshift mutations in the type II receptor of transforming growth factor-b gene in sporadic colon cancer with microsatellite instability." Mutat.Res.Genomics. 382. 115-120 (1998)
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[Publications] Goseki-Sone,M.: "Expression of the mutant(1735T-del)tissue-nonspecific alkaline phosphatase gene from hypophosphatasia patients." J.Bone Miner.Res.13. 1827-1834 (1998)
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[Publications] Ikeda,M.: "Close correlation between mutations of E2F4 and hMSH3 genes in colorectal cancers with microsatellite instability." Cancer Res.58. 594-598 (1998)
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[Publications] Shimizu,T.: "A simple and efficient purification of transduced cells by using green fluorescent protein(GFP)gene as a selectable marker." Acta Paediatr.Jpn.40. 586-592 (1998)
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[Publications] Igarashi,T.: "A novel strategy of cell targeting based on tissue specific expression of the ecotropic retrovirus receptor gene." Human Gene Ther.9. 2691-2698 (1998)
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[Publications] Koseki,S.: "Factors governing the activity in vivo of ribozymes transcribed by RNA polymeraseIII." J.Viol.73. 1868-1877 (1998)