1999 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子発現による薬物排泄系の再構築を基盤とした薬物相互作用の新評価・予測法の開発
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09557211
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
乾 賢一 京都大学, 大学院・医学研究科, 教授 (70034030)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桂 敏也 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (10283615)
齋藤 秀之 京都大学, 大学院・医学研究科, 講師 (40225727)
橋本 征也 京都大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (90228429)
矢野 育子 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (50273446)
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| Keywords | 薬物輸送 / 尿細管分泌 / 有機アニオントランスポータ / 有機カチオントランスポータ / P・糖タンパク質 / トランスフェクション / アフリカツメガエル卵母細胞 / cDNAクローニング |
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| Research Abstract |
本年度では、既にクローン化したラット腎由来の有機アニオントランスポータ(OAT1、OAT-K1、OAT-K2)並びに有機カチオントランスポータ(OCT1、OCT2)を中心にトランスポータ安定発現細胞の確立とそれらを用いた薬物相互作用の解析を実施し、以下の研究成果を得た。
1.遺伝子導入による薬物トランスポータ安定発現細胞の確立:哺乳類発現ベクター(pBK-CMV)にOAT-K1、OAT-K2、OCT1、OCT2 cDNAを挿入し、培養上皮細胞MDCKによるトランスポータ発現細胞を作成した。mRNA並びに蛋白レベルでの検出・評価を行い、最終的に各トランスポータの安定発現株を単離した。
2.薬物トランスポータ安定発現細胞による薬物間相互作用の解析:確立した薬物トランスポータ安定発現細胞を用い、種々イオン性薬物の輸送特性と薬物間相互作用について機構論的・速度論的解析を行った。その結果、OAT-K1及びOAT-K2は近位尿細管上皮細胞の管腔側刷子縁膜におけるアニオン性薬物の尿細管分泌に関わること、両トランスポータを介するメトトレキセート輸送は高脂溶性の有機アニオン共存により著しく低下することが明らかとなった。またOCT1及びOCT2安定発現細胞によるテトラエチルアンモニウム輸送に対して抗不整脈薬、モノアミン類さらにヒスタミン受容体拮抗薬など構造的に多様なカチオン性薬物が阻害効果を示すこと、両トランスポータは互いに類似した薬物認識特性を有することが判明した。
3.アフリカツメガエル卵母細胞発現系による薬物間相互作用の解析:近位尿細管側底膜型有機アニオントランスポータOAT1によるパラアミノ馬尿酸取り込みは、ループ利尿薬やチアジド系利尿薬の存在下顕著に低下した。さらに、アセタゾラミドやクロルプロパミドがOAT1の基質になることを実証することができた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] T.Terada: "The N-terminal Halves of rat H/peptide transporters are responsible for their substrate recognition"Pharm. Res.. 17・1. 15-20 (2000)
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[Publications] Y.Urakami: "Gender differences in expression of organic cation transporter OCT2 in rat kidney"FEBS Lett.. 461・3. 339-342 (1999)
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[Publications] J.Nagai: "Inhibitory effect of KW-3902, an adenosine Al receptor antagonist, on paminohippurate transport in OK cells"Biochim. Biophys. Acta. 1419・1. 164-172 (1999)
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[Publications] S.Masuda: "Functional analysis of rat renal organic anion transporter OAT-K1: bidirectional methotrexate transport in apical membrane"FEBS Lett.. 459・1. 128-132 (1999)
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[Publications] K.Sawada: "Effects of glibenclamide on glycylsarcosine transport by the rat peptide transporters PEPT1 and PEPT2"Br. J. Pharmacol.. 128・6. 1159-1164 (1999)
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[Publications] T.Terada: "Functional characteristics of basolateral peptide transporter in the human intestinal cell line Caco-2"Am. J. Physiol. 276・6. G1435-G1441 (1999)
