2000 Fiscal Year Annual Research Report

薬物代謝酵素系(酸化酵素系と抱合酵素)を安定に発現する細胞株の開発

Research Project

Project/Area Number	09558089
Research Institution	Himeji Institute of Technology
Principal Investigator	井柳堯姫路工業大学, 理学部, 教授 (50001699)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	生城真一姫路工業大学, 理学部, 助手 (50244679) 衣斐義一姫路工業大学, 理学部, 助手 (60232980) 木村成伸姫路工業大学, 理学部, 助教授 (90291608)
Keywords	薬物代謝酵素 / グルクロン酸転移酵素 / 酸化酵素と抱合酵素 / タンパク質の発現系 / チトクロームP450 / チトクロームP450還元酵素 / フラビン酵素 / 電子伝達素
Research Abstract	本研究では肝臓での薬物代謝反応(第1相及び2相反応)を試験管内で再構成することを目的として、薬物酸化系酵素(NADPH-P450還元酵素:CPR及びチトクロムP450:CYP)と薬物抱合酵素(UDP-グルクロン酸転移酵素:UGT)を含む発現系の構築を行った。 (1)COS細胞を用いたラットUGT分子種の発現系の確立肝臓ミクロソームで発現しているUGT1(A1,2,3,5,6,7)及びUGT2(B3,6,12)の計9種の分子種の発現系を構築し、それぞれをCOS細胞に導入して基質特異性の検討を行った。UGT1A1はビリルビン抱合を行う唯一の分子種であることが示された。p-ニトロフェノールの抱合化にはUGT1ファミリーのうちPhenol-clusterに属するUGT1A6,1A7とUGT2B3,2B6,2B12が関与し、ステロイドホルモンであるテストステロンはUGT2B3及び2B6によってのみ抱合化をうけ、発現量あたりの活性値には差異がみられた。このように肝臓ミクロソームにおける薬物抱合能はUGT分子種の存在比、その基質特異性及び比活性によって決定されることが示された。 (2)酵母を用いたCYP,CPR及びUGT発現系の確立薬物代謝過程における連続的な変換反応(水酸化、抱合化)を解析するために、酵母CPR、ラットCYP1A1及びUGT1A6cDNAを自律複製型あるいは染色体型ベクターに挿入し、それぞれを酵母に導入して7-エトキシクマリン(7EC)の水酸化及び抱合化反応の解析を行った。単独発現系においては特異的抗体によりそのタンパク発現が確認され、水酸化体あるいは抱合体の生成がみられた。それぞれの混合測定系においてはCPR-CYP1A6による水酸化体の蓄積後、UGT1A6による抱合体の生成が検出された。このように動物細胞及び酵母での発現系を用いることにより薬物代謝における連続的な代謝過程を再構成することができ、異なるUGT分子種との組み合わせにより多種にわたる薬物の体内動態を解析することが可能であることが示された。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Y.Emi,A.Ohnishi,T.Kajimoto,S.Ikushiro and T.Iyanagi.: "A 66-base-pair enhancer moduile activates the expression of a distinct isofor of UDP-glucuronosyltransferase family 1(UGT1A2) in primary hepatocytes."Arch.Biochem.Biophys. 378. 1-10 (2000)
[Publications] H.Matsuda,S.Kimura and T.Iyanagi.: "One-electron reduction of quinones by the neuronal nitric-oxide synthase reductase domain."Biochemica et Biophysica Acta. 1459. 345-356 (2000)
[Publications] 生城真一,衣斐義一,井柳堯: "薬物、生体異物代謝におけるグルクロン酸転移酵素とその分子多様性"Bio clinica(北隆館). 15(7). 38-41 (2000)
[Publications] 生城真一,衣斐義一,井柳堯: "UDP-グルクロン酸転移酵素"肝臓(日本肝臓学会). 平成13年6月号(印刷中). (2000)
[Publications] 井柳堯: "グルクロンシールトランスフェラーゼ薬物動態作用と遺伝子多型"医薬ジャーナル社(印刷中). (2000)
[Publications] 井柳堯: "グルクロン酸転移酵素臨床薬物代謝化学"広川書店(印刷中). (2000)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

薬物代謝酵素系(酸化酵素系と抱合酵素)を安定に発現する細胞株の開発

Principal Investigator

井柳 堯 姫路工業大学, 理学部, 教授 (50001699)

Research Products

[Publications] Y.Emi,A.Ohnishi,T.Kajimoto,S.Ikushiro and T.Iyanagi.: "A 66-base-pair enhancer moduile activates the expression of a distinct isofor of UDP-glucuronosyltransferase family 1(UGT1A2) in primary hepatocytes."Arch.Biochem.Biophys. 378. 1-10 (2000)

[Publications] H.Matsuda,S.Kimura and T.Iyanagi.: "One-electron reduction of quinones by the neuronal nitric-oxide synthase reductase domain."Biochemica et Biophysica Acta. 1459. 345-356 (2000)

[Publications] 生城真一,衣斐義一,井柳堯: "薬物、生体異物代謝におけるグルクロン酸転移酵素とその分子多様性"Bio clinica(北隆館). 15(7). 38-41 (2000)

[Publications] 生城真一,衣斐義一,井柳堯: "UDP-グルクロン酸転移酵素"肝臓(日本肝臓学会). 平成13年6月号(印刷中). (2000)

[Publications] 井柳堯: "グルクロンシールトランスフェラーゼ薬物動態作用と遺伝子多型"医薬ジャーナル社(印刷中). (2000)

[Publications] 井柳堯: "グルクロン酸転移酵素臨床薬物代謝化学"広川書店(印刷中). (2000)

井柳堯姫路工業大学, 理学部, 教授 (50001699)