蛋白発現細胞株を使用したヌクレオキャプシド構成蛋白の解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670312
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 西尾 真智子 三重大学, 医学部, 助手 (70156040)
• Keywords: パラインフルエンザウイルス / P蛋白 / NP蛋白 / モノクローナル抗体 / homotrimer

Research Abstract

1.p蛋白がmultimerになるためにどの領域が必要かを調べるためにまず、P/V共通領域とP蛋白specificな領域に分けて全長のP蛋白との結合を調べた.その結果、P蛋白specificな領域であることが解った。さらにP蛋白のC末側より削っていき、どこまで削っても結合するかを調べたところC末147アミノ酸を削ってもP蛋白と結合した。したがって165番目のアミノ酸より248番目のアミノ酸の領域が必要であることが解った。更に領域を絞るためP蛋白の中間の領域を抜いたP蛋白のmutantsを発現させて調べたところ211番目のアミノ酸より248番目のアミノ酸の領域がmultimerを形成するために必須の領域であることが明らかになった。
2.Chemical cross-linker DTSSP (3,3'-dithiobis (sulfosuccinimidyl propionate))を使ってP蛋白が何量体を形成するかを調べたところ、3主体を形成していることが解った。multimerを形成するために必須の領域211〜248アミノ酸の領域はシステインを含んでおらずhomo-oligomersはdisulfide結合によって起こるとは考えられない。この領域の立体構造を推測するとα-helix構造をとっていると考えられるのでcoiled-coilsによってtrimerの構造をとっていると考えられる。
3.いろいろなdeleted NP蛋白を発現させることによって、 NP蛋白に対する41個のモノクローナル抗体のマッピングを行った。その結果、N末より47番目のアミノ酸の領域を認識する抗体が5個、101〜200番目のアミノ酸の領域を認識する抗体が6個、444〜494番目のアミノ酸の領域を認識する抗体が20個、495〜N末の領域を認識する抗体が10個という結果になった。

Research Products

• [Publications] Kousuke Okamoto: "An anti-fusion regulatory protein-1 monoclonal antibody suppresses human parainfluenza virus type 2-induced cell fusion." Journal of General Virology. Vol.78. 83-89 (1997)
• [Publications] Kousuke Okamoto: "Paramyxovirus-induced syncytium cell formation is suppressed by a dominant negative fusion regulatory protein-1 (FRP-1)/CD98 mutated construct." Journal of General Virology. Vol.78. 775-783 (1997)
• [Publications] Kousuke Okamoto: "Enhancement of human parainfluenza virus-induced cell fusion by pradimicin,a low molecular weight mannose-binding antibiotic." Medical Microbiology and Immunology. Vol.186. 101-108 (1997)
• [Publications] Shigeru Suga: "Human immunodeficiency virus type-1 envelope glycoprotein gp120 induces expression of fusion regulatory protein (FRP)-1/CD98 on CD4+ T cells." Medical Microbiology and Immunology. Vol.186. 237-243 (1997)
• [Publications] Machiko Nishio: "Human parainfluenza virus type 2 phosphoprotein : Mapping of monoclonal antibody epitopes and location of the multimerization domain." Journal of General Virology. vol.78. 1303-1308 (1997)
• [Publications] Morihiro lto: "Role of a single amino acid at the amino terminus of the simian virus 5 F2 subunit in svncytium formation." Journal of Virology. Vol.71. 9855-9858 (1997)