1997 Fiscal Year Annual Research Report
肝癌遺伝子治療の研究・標的細胞への選択的遺伝子導入と導入遺伝子の効率的発現
Project/Area Number |
09670557
|
Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
Research Institution | Nagasaki University |
Principal Investigator |
中尾 一彦 長崎大学, 医学部, 助手 (00264218)
|
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
馬詰 裕之 長崎大学, 医学部附属病院, 医員
有馬 哲彦 長崎大学, 医学部附属病院, 医員
中田 恵輔 長崎大学, 保健管理センター, 助教授 (40217740)
|
Keywords | 肝癌 / 遺伝子治療 / レトロウイルスベクター / ヒトAFP |
Research Abstract |
1.種々のAFP転写調節領域を持つレトロウィルスベクターの作製:2種の目的遺伝子(HSV-Tk遺伝子、β-gal遺伝子)の上流に、その調節領域として以下の3種のAFP遺伝子転写制御領域を接続し、計6種の組換えレトロウイルスベクターを作成した。(1)0.3kbのヒトAFP遺伝子プロモーター(LNAF0.3TK,LNAF0.3GAL)、(2)ヒトAFPエンハンサーBをAFPプロモーターの上流に接続(LNAFE0.3TK,LNAFE0.3GAL)、(3)遺伝性高AFP血症で発見されたAFP転写開始点より塩基上流のGをAに置換した変異型ヒトAFPプロモーター(LNAFM0.3TK,LNAFM0.3GAL)。 2.in vitroにおける検討:HSV-Tk遺伝子を持つ組換えレトロウイルス3種をヒト肝癌細胞株HuH7,HepG2,PLC/PRF/5,huHl/cl.2と非肝癌細胞株HeLaに感染させ、GCVによる殺傷効果をMTT法により比較検討した。LNAF0.3TK感染では肝癌細胞特異的かつAFP産生量に応じた殺傷効果が得られ、ステロイド併用で殺傷効果が増強された。LNAFE0.3TK,LNAFM0.3TK感染ではいずれの肝癌細胞においてもLNAF0.3TKに比べて強い抗腫瘍効果が認められた。非肝癌のHelaはいずれのウイルスベクターを用いてもGCVによる抗腫瘍効果はみられなかった。 3.in vivoにおける検討:(1)LNAF0.3TK感染HuH7細胞をヌードマウス皮下に移植し、GCVによる抗腫瘍効果を検討したところ、腫瘍増殖はGCV治療により著明に抑制された。治療群の血中AFPレベルも対照群に比し明らかに低値であった。(2)LNAF0.3TKおよびLNAFE0.3TK感染PLC/PRF/5細胞をヌードマウス皮下に移植し、同様に抗腫瘍効果を比較検討した。LNAFE0.3TK感染細胞移植腫瘍に対するGCV治療はLNAF0.3TK感染移植腫瘍に比べて強い抗腫瘍効果を示した。
|
Research Products
(2 results)
-
[Publications] Fumihiro Mawatari: "Retrovirus-mediated gene therapy for hepatocellular carcinoma : Selective and enhanced suicide gene expression regulated by human α-fetoprotein enhancer directly linked to its promoter" Cancer Gene Therapy. (in press).
-
[Publications] Toshihito Ueki: "Retrovirus-mediated gene therapy for human hepatocellular carcinoma transplanted in athymic mice" International Journal of Molecular Medicine. (in press).