1997 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
09670759
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Research Institution | Jikei University School of Medicine |
Principal Investigator |
鈴木 英明 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (70196856)
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Keywords | 転写因子 / ラミニン / プロモーター / クローニング / ワンハイブリッドシステム / ルシフェラーゼ / イ-スト / プラスミド |
Research Abstract |
ラミニンは、高血圧症、心筋症、糖尿病において病的に増加し、組織の硬化を招く一要因として報告されている。本教室では、ラミニンB2鎖プロモーターの転写活性の調節に強く関与するbcn-1モチーフと、そこに結合する転写因子BCN-1の存在を見い出し、検討してきた。 そこで本年度の研究計画に従い、BCN-1転写因子をクローニングすることを目的に、イ-ストのワンハイブリッドシステムを用いてcDNAライブラリーのスクリーニングを施行した。 得られた10個の一次陽性クローンをミュータントイ-ストに再度トランスフォームし、6個の二次陽性クローンを得た。パ-シャルシークエンスしたところ、いずれも転写因子をコードするクローンであった。 今後の計画としてBCN-1クローンを選別するため、以下の事項を検討する。 1)陽性クローンは、無細胞系にてIn vitroの転写/翻訳し、EMSAにてDNA結合能を評価する。 2)またCOS cellを用い、クローンをExpressionし、核タンパクをさらにEMSAにて評価する。 3)あわせてクローンは、BCN-1レポータープラスミドとCo-expressionし、ルシフェラーゼアッセイにて評価する。 4)最終陽性クローンは全シークエンスを決定し、データベースにて検討する。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Hideaki Suzuki: "Activation of a DNA-binding protein recognized by a transcriptional element,bcn-1,from the laminin B2 chain gene promoter." J.Biol.Chem.271. 18981-18988 (1996)
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[Publications] Hideaki Suzuki: "Activation of BCN-1 protein by IL-1b and PMA in mesangial cells." J.Am.Soc.Nephrology.6(3). 841 (1995)
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[Publications] Hideaki Suzuki: "Treatment of glomerular epithelial and mesangial cells with IL-1B and PNA activastes proteins and bind to a motif from the laminin B2 chain promoter." J.Am.Soc.Nephrology.5(3). 820 (1994)