1997 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
09671089
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
|
| Research Institution | Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health |
|---|
Principal Investigator |
大薗 恵一 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 環境影響部門, 部長 (20270770)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳原 格 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 環境影響部門, 流動研究員
虫明 聡太郎 大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 環境影響部門, 主任研究員 (90291947)
|
|---|
| Keywords | ビタミンD応答配列 / ビタミンD受容体 / 24位水酸化酵素 / 副甲状腺ホルモン / レポーター |
|---|
| Research Abstract |
最近、chick PTH(parathyroid hormone)遺伝子等においてDR3型のnVDRE(negative vitamin D response element)が報告され、オステオカルシン遺伝子等の正の応答性を示すDR3型の配列(pVDRE)との違いが注目される。そこで、nVDREとpVDREを比較検討した。
A.nVDRE配列:1.GGGTCAggaGGGTGT(chick PTH遺伝子)、2.AGGCTAgccAGTTCA nx18GGTTCAgtgAGGTAC(rat PTH遺伝子)。これらのnVDREをそれぞれluciferase発現ベクターに挿入し、reporter plasmidを作製した。このreporterをSaos-2,COS7細胞に、後者ではビタミンD受容体発現ベクターと共に導入し、10^<-8>M1,25(OH)_2D_3を添加してその活性の変化を検討した。その結果、chickあるいはrat PTH遺伝子nVDREにおいて、添加群はcontrol群に比して、それぞれ86.7±6.3,86.4±10.3%の活性を示した。さらに、rat PTH遺伝子のnVDREを2つ含む場合でも1,25(OH)_2D_3添加群はcontrol群の85.9%の活性であった。
B.chick PTH遺伝子nVDREは、pVDREの配列と、最後の2塩基において異なる。従って、本nVDREの塩基配列をGGGTCAggaGGGTGAあるいはGGGTCAggaGGGTCAに置換し、ホルモン応答性を検討したところ、それぞれcontrol群の53.5,178.1%であった。最後の2塩基置換を行うとビタミンD応答性が負から正に転換された。
C.ビタミンDおよびレチノイドX受容体を用いて、in vitroにおけるnVDREとの結合性を検討したが、10^8M1,25(OH)_2D_3の添加によって、結合性の低下を認めなかった。
|
Research Products
(5 results)
-
[Publications] Nakajima S.et al.: "Characterization of the activation function-2 domain of the human 1,25-dihydroxyvitamin D_3 receptor." Mol Cell Endocrinol.(in press).
-
[Publications] Uchida M,et al.: "In vitro binding of vitamin D receptor occupied by 24R,25-dihydroxyvitamin D_3 to vitamin D responsive element of human osteocalcin gene." J.Steroid Biochem Mol Biol. 60. 181-187 (1997)
-
[Publications] Nakajima S,et al.: "A 65 Kilodalton nuclear protein binds to the human vitamin D receptor : A bacterial expressed histidine tagged receptor study." Biochem Biophys Res Commun. 232. 806-809 (1997)
-
[Publications] Ozono K,et al: "AF-2 region is not critical for the vitamin D receptor to suppress the transcription via nVDRE in chick PTH and human PTHrP genes." Cancer-induced bone diseases(abstract). 30- (1997)
-
[Publications] Ozono K.: "Recent advances in molecular analysis of skeletal dysplasia." Acta Paediatr Jpn. 39. 491-498 (1997)
