1997 Fiscal Year Annual Research Report
糖蛋白質アスパラギン型糖鎖の持つ分子シャペロン様蛋白質高次構造形成促進機能の研究
Project/Area Number |
09680599
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Research Institution | Osaka Prefecture University |
Principal Investigator |
山口 春樹 大阪府立大学, 農学部, 助教授 (40081583)
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Keywords | 糖蛋白質 / 膵臓リボヌクレアーゼB / アスパラギン型グリカン / 卵白リゾチーム / ポリペプチド折れたたみ / 分子シャペロン |
Research Abstract |
糖蛋白質のアスパラギン(Asn)結合型糖鎖の持つ還元変性ポリペプチドの折れたたみ酸化再生促進能について調べた。Asn34上に高マンノース型糖鎖を持つウシ膵臓リボヌクレアーゼB(RNase B)とその天然非糖蛋白質型であるリボヌクレアーゼA(RNase A)を対象に、還元変性状態からのCu^<2+>触媒酸化再生を比較したところ、1)RNase Bの方がRNase Aよりも著しく速く活性を回復すること,2)RNase Bの再生中間体はRNase Aのそれよりも多くのANSを、より短い再生時間内で結合するようになること、3)再生の進行に伴うRNase Bの固有チロシン蛍光スペクトル変化がRNase Aよりもずっと速くnative構造のスペクトルに接近すること、などが明らかになった。糖蛋白質からプロテアーゼ処理によって分離した遊離のAsn結合糖鎖は、高マンノース型のみならず複合型のものも、その希薄溶液(1-2mM)が還元変性RNase AやRNase Bの酸化再生に対して、RNase Bの分子内Asn糖鎖に認められた再生促進能と同じ機能を有することが観察された。また、この遊離のAsn糖鎖は、還元変性ニワトリ卵白リゾチームの酸化再生に際し、その凝集を強く抑制すると共に、折れたたみ高次構造形成を顕著に促進することがわかった。このような還元変性ポリペプチドの酸化再生促進機能は、メチル α-D-マンノシド、メチル β-D-ガラクトシド、グルコース、シュークロース、α-シクロデキストリン、GlcNAc-Asnなどにはほとんど認められないことから、Asn結合糖鎖構造特異的であると考えられる。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Haruki Yamaguchi: "A Chaperone-like Function of Asn-Glycan in Refolding of Denatured Polypeptides" Glycoconjugate Journal. 14,Supplement 1. S40- (1997)
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[Publications] Ippei Nishimura: "Oxidative Refolding of Bovine Pancreatic RNase A and B Promoted by Asn-Glycans" Journal of Biochemistry. 123,No.3. 516-520 (1998)