性ステロイドによる一酸化窒素産生ニューロン調節機構の形態学的および生理学的解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09680798
• Research Institution: Kochi Medical School
• Principal Investigator: 由利 和也 高知医科大学, 医学部, 教授 (10220534)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田口 尚弘 高知医科大学, 医学部, 助手 (80127943) ; 高野 康夫 高知医科大学, 医学部, 講師 (70117034)
• Keywords: エストロゲン / 一酸化窒素 / 一酸化窒素合成酵素 / NADPHジアフォラーゼ / 内側視束前野 / 免疫組織化学 / in situ ハイブリタイゼーション / マイクロダイアリシス

Research Abstract

成熟雌ラットを卵巣摘除(OVX)群、低エストロゲン群、高エストロゲン群に分けた。3グループの凍結切片を作成し、NADPH-diaphorase(NADPH-d)法および一酸化窒素合成酵素(NOS)に対する抗体を用いた免疫組織化学法を行い、視床下部のanteroventral periventricular nucleus(AVPv)、medial preoptic nucleus(MPN)における陽性ニューロン数を計測した。AVPvではNADPH-dおよびNOS陽性ニューロン数に変化は観察されなかったが、MPNにおいては、高エストロゲン群においてOVX群や低エストロゲン群に比べて有意にNADPH-dおよびNOS陽性ニューロン数の増加が認められた。次にnNOSmRNAに対するin situハイブリダイゼーション法を施行した。プローブは、45ベースのオリゴヌクレオチドプローブを35Sにてラベルしたものを使用した。AVPvやMPNにおける陽性細胞数、陽性細胞上の銀粒子数はOVX群と低エストロゲン群との間に有意な差は認められなかった。現在、高エストロゲン群について解析を進めているところである。また、OVX群および低エストロゲン群を用いてマイクロダイアリシス法を施行した。プローブをAVPvに刺入し、15分ごとにサンプルを回収し、NOとアミノ酸をHPLCにて解析した。NMDAによる刺激に対するNO産生の増加に有意な差は観察されなかったが、NMDA刺激によるGABA放出量は低エストロゲン群において有意に増加しており、NMDAレセプターを介したエストロゲンによるGABA放出の調節が示唆された。
以上より、視床下部視束前野のNO産生は、diestrusに相当する低いエストロゲンレベルにおいては変化を受けないが、proestrusに相当する高いエストロゲンレベルによって影響を受ける可能性が考えられた。

Research Products

• [Publications] Pasterkamp R J: "The perinatal ontogeny of estrogen receptor-immunoreactivity in the developing male and female rat hvpothalamus" Dev.Brain Res. 91. 300-303 (1996)
• [Publications] Hu Z: "The in vivo time course for elimination of adrenalectomy-induced apoptotic profiles form the granule cell layer of the rat hippocampus" J.Neurosci. 17. 3981-3989 (1997)
• [Publications] Hu Z: "Chronic loss of glucocorticoids following adrenalectomy down-regulates the expression of glucocorticoid receptor mRNA in the rat forebrain" Eur.J.Neurosci. 9. 1778-1783 (1997)
• [Publications] Hu Z: "Adrenalectomy-induced granule cell death is predicated on the disappearance of glucocorticoid receptor immunoreactivity in the rat hippocampal granule cell layer" Brain Res. 778. 293-301 (1997)
• [Publications] Pasterkamp R J: "Differential expression of estrogen receptor mRNA and protein in the female rat preoptic area" Neurosci.Lett. 239. 81-84 (1997)
• [Publications] 由利 和也: "脳の性差と性ホルモン" 医学のあゆみ. 184. 634-635 (1998)
• [Publications] Yang Y: "Immunocytochemical analysis of sex differences in calcitonin gene-related peptide in the rat dorsal root ganglion,with special reference to estrogen and its receptor" Brain Res. 791. 35-42 (1998)
• [Publications] Hu Z: "In vivo time course of morphological changes and DNA degradation during the degeneration of castration-induced apoptotic prostate cells" Cell Tissue Res. 294. 153-160 (1998)
• [Publications] Kawata M: "Steroid Hormones and their Receptors in the Brain" J.Steroid Biochem.Molec.Biol. 65. 273-280 (1998)
• [Publications] 由利 和也: "脳の性差と神経細胞死" 脳21. 1. 177-182 (1998)
• [Publications] Lu H: "The Effects of Oestrogen and Progesterone on Serotonin and its Metabolite in the Lateral Septum,Medial Preptic Area and Ventromedial Hypothalamic Nuvleus of Fmale Rats" J.Neuroendocrinol. 10. 919-926 (1998)