1999 Fiscal Year Annual Research Report
小脳プルキンエ細胞におけるシナプス構築機構の分子生物学的解析
Project/Area Number |
09680804
|
Research Institution | Akita University |
Principal Investigator |
目黒 裕之 秋田大学, 医学部, 助手 (60291093)
|
Keywords | シナプス形成 / NMDA / サブトラクション / in situハイブリダイゼーション法 / プルキンエ細胞 / ノーザンプロット / 神経活動 / 神経刺激物質 |
Research Abstract |
シナプス形成に関与する新たな遺伝子の同定のため、神経毒を投与し小脳プルキンエ細胞への入力の一つである登上線維を選択的に遮断したラットと正常ラットより調製したmRNAを使いたサブトラクションクローニングを行い、遺伝子数種類を得た。幾つかのクローンについて、ノーザンブロットにより発現量の比較を行ったが、何れの実験でも転写産物の有意な変化を認めることができなかった。つぎに、プルキンエ細胞を含めた神経細胞に発現し、神経活動に伴い変化する遺伝子を同定する目的で、より均一な条件を作れるラット胎児の初代培養系細胞を用い、神経刺激物質NMDAの投与前後でのmRNAを調製し、サブトラクションを行った。得られたサブトラクション産物をプローブに用い、ライブラリーをスクリーニングし数個のクローンを得た。これらをプローブにin situハイブリダイゼーションを行い、プルキンエ細胞を含めた神経細胞に転写産物が発現することを一つのクローンで確認した。これらのクローンの塩基配列の決定をし、蛋白翻訳領域の全域を含むクローンのスクリーニングを続けている。今後詳細な発現領域をin situハイブリダイゼーション法、免疫組織化学法で確認し、初代培養細胞もしくはNMDA受容体発現培養系を用いた強制発現により機能解析をおこなう。
|