1997 Fiscal Year Annual Research Report
スレオニンアルドラーゼを用いたβ-ヒドロキシ-α-アミノ酸類の立体選択的合成
Project/Area Number |
09760099
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Research Institution | Toyama Prefectural University |
Principal Investigator |
劉 吉泉 富山県立大学, 工学部, 助手 (30281249)
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Keywords | Threonine aldolase / β-hydroxy-α-amino acid / Pseudomonas / Arthrobacter / Saccharomyces cerevisiae |
Research Abstract |
スレオニンアルドラーゼは、β-ヒドロキシ-α-アミノ酸を分解して、グリシンとアルデヒドを生成する反応、及びその逆反応を触媒する。本研究では、医薬品及び医薬品原料であるβ-ヒドロキシ-α-アミノ酸の立体選択的酵素合成方法の開発の一環として、Pseudomonas sp.NCIMB 10558とSaccharomyces cerevisiae由来の低基質特異性L-スレオニンアルドラーゼ遺伝子及びArthrobacter sp.DK-38のD-スレオニンアルドラーゼ遺伝子の取得と解析を行った。D-スレオニンアルドラーゼを野生菌株から高度に精製し、N-末端アミノ酸配列を決定した。本配列に基づいて合成したオリゴヌクレオチドプローブを用いてArthrobacterのgenomic DNAライブラリーをハイブリダイゼーションを行い、D-スレオニンアルドラーゼ活性を有するクローンを単離した。一次構造解析の結果、本酵素は既知酵素との相同性は認められなく、新規酵素であると判明した。同様に、Pseudomonas sp.NCIMB 10558とSaccharomyces cerevisiae由来の低基質特異性L-スレオニンアルドラーゼ遺伝子のクローニング、一次構造の解明、大量発現系の構築にも成功した。又は、化学修飾及び部位特異的変異手法の組み合わせによって、D-スレオニンアルドラーゼとL-スレオニンアルドラーゼの活性中心のリジン残基を同定した。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Ji-Quan Liu: "Gene cloning, nucleotide sequencing,purification, and characterization of a low-specificity L-threonine aldolase from Pseudomonas sp.NCIMB 10558" Appl. Environ.Microbiol.64・2. 549-554 (1998)
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[Publications] Ji-Quan Liu: "The GLY1 gene of Saccharomyces cerevisiae encodes a low-specific L-threonine aldolase that catalyzes cleavage of L-allo-threonine and L-threonine to glycine" Eur.J.Biochem.245・2. 289-293 (1997)