1997 Fiscal Year Annual Research Report
EB(エプスタイン・バ-ル)ウイルス・ベクターによるヒト造血幹細胞への遺伝子導入
Project/Area Number |
09770208
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Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
Principal Investigator |
松田 修 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (00271164)
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Keywords | 遺伝子治療 / 造血幹細胞 / アデノシン・デアミナーゼ / EBウイルス |
Research Abstract |
我々はこれまで,EBVエピゾ-マル・ベクターにより,種々の細胞に非常に効率良く遺伝子導入/発現が可能であることを示し,この系を遺伝子治療に応用する試みを行ってきた。本研究ではヒト造血幹細胞を標的細胞とし,これに外来遺伝子を導入/発現させる新しいシステムの樹立を試みた。 白血病,または悪性リンパ腫の患者から得たCD34陽性細胞に,アデノシン・デアミナーゼ(ADA)遺伝子発現ユニットを有するEBVエピゾ-マル・ベクターをex vivoで導入した。導入後の細胞をIL-3,IL-6,SCF存在下で培養したのち解析すると,RT-PCRにより導入遺伝子特異的なmRNAの発現を,また酵素活性の測定により1,5-2.0倍のADA活性の上昇を認めた。また,導入後の細胞を造血因子を含むメチルセルロース軟寒天培地中で培養することによりCFU-cコロニーを作製し,個々のコロニーごとにRT-PCR解析をおこなったところ,37%以上のコロニー形成細胞に導入できていたことがわかった(Satoh et at.,投稿中)。 一方,さらに導入効率を高めるために,EBVベクターをカチオニック・リポソーム,あるいはHVJ-リポソームと組み合わせた系を確立した(Satoh et al.,BBRC誌,1997年;Hirai et al.,BBRC誌,1997年)。この系を用いてヒト骨髄細胞にマーカー遺伝子を導入/発現させ得ることを,FACS解析にて確認している(Satoh et al.,BBRC誌,1997年)。 現在,導入遺伝子がリンパ球内でも維持,発現するかを解析し,またin vivoでの副作用の有無を検証する目的で,NOD/SCIDマウスへの移植実験を行う予定である。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Mazda,O.et al.: "Extremely Efficient Gene Transfection by Epstein-Barr Virus Vectors into Lymphohematopoietic Cell Lines." J.Immunol.Methods. 204・2. 143-152 (1997)
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[Publications] Mazda,O.et al.: "The αβ T Cell Receptor Clustering upon Superantigen/MHC Recognition." Scand.J.Immunol.46・3. 262-267 (1997)
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[Publications] Satoh,E.et al.: "Efficient Gene Transduction by Epstein-Barr Virus(EBV)-Based Vectors Coupled with Cationic Liposome and HVJ-Liposome." Biochem.Biophys.Res.Commun.238・3. 795-799 (1997)
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[Publications] Hirai,H.et al.: "Use of Epstein-Barr Virus-based Vector/hemagglutinating Virus of Japan-Liposome Complex Vector for Targeted Gene Therapy of Epstein-Barr Virus-associated Neoplasms" Biochem.Biophys.Res.Commun.241・1. 112-118 (1997)