1997 Fiscal Year Annual Research Report
マシャド-ジョセフ病遺伝子のalternative splicingの解析
Project/Area Number |
09770437
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Research Institution | University of Tsukuba |
Principal Investigator |
渡邊 雅彦 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (20282361)
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Keywords | Machado Joseph disease / Tripled repeat / RNA splicing / cDNA / cerebellar ataxia |
Research Abstract |
研究背景 Machado-Joseph病(MJD)は優性小脳失調症で原因遺伝子(MJD gene)は14q32.1に存在し、CAGリピートを有しいる。疾患染色体上ではこの反復配列のリピート数が増大しており、リピート数と発症年齢の間には負の相関関係があることが明らかにされている。しかし、遺伝子産物の機能については不明である。 MJD geneの転写産物のプロセッシング過程は複雑で、本遺伝子から少なくとも4種類の転写産物を生ずることがcDNA cloningにより見い出されている。 材料・方法 1.ヒト脳ならびにリンパ芽球由来全RNAの抽出 : 凍結剖検脳(コントロール脳ならびにMJD患者脳)から大脳ならびに小脳を小塊として切り出した。これらの小組織塊を液体窒素中で粉砕し、酸グアニジン法により全RNAを抽出した。患者ならびにコントロールの末梢血リンパ球をEBウイルスによりトランスフォームし、培養増殖した。こられの培養リンパ芽球より酸グアニジン法により全RNAを抽出した。 2.RT-PCR解析 骨格筋、肺、肝ポリA+RNAを鋳型とし、エクソン1ならびにエクソン4に特異的なPCRプライマーを用いてRT-PCR解析を行った。複数の転写産物が検出されたものでは、より内側の配列に特異的なPCRプライマーを用いてnested PCRを行った。 結果 コントロール脳、リンパ芽球全RNA、骨格筋、肺、肝ポリA+RNAより複数のRT-PCR産物が検出した。これらのうち筋ならびに脳由来の産物はnested PCRによっても増幅可能であったのでMJD遺伝子転写産物に由来する特異的な増幅産物であると判断した。 考察 MJD遺伝子の転写産物は多彩なalternative splicingを受け、多種類のアイソフォームレパトアを形成する可能性がある。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] K.Nishiyama, S.Murayama, J.Goto, M.Watanebe, et al.: "Regional and cellular expression of the Machado-Joseph disease gene in brains of normal and affected individuals" Annals of Neurology. 40. 776-781 (1996)
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[Publications] Y.Ichikawa, M.Watanabe, et al.: "A Japanese family carrying a novel mutation in the Emery-Dreifuss muscular dystrophy gene" Annals of Neurology. 41. 399-402 (1997)
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[Publications] J.Goto, M.Watanabe, et al.: "Machado-Joseph disease gene products carrying different carboxyl termini" Neuroscience Research. 28. 373-377 (1997)
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[Publications] K.Ishikawa, H.Tanaka, M.Saito, N.Ohkoshi, T.Fujita, K.Yoshizawa, T.Ikeuchi, M.Watanabe, et al.: "Japanese families with autosomal dominant cerebellar ataxia map to chromosome 19q13.1-p13.2 and are strongl associated with mild CAG expansions in the spinocerebellar ataxia type 6 gene in chromosome 19q13.1" American Journal of Human Genetics. 61. 336-346 (1997)
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[Publications] 渡邊雅彦、他: "前庭機能障害が認められた脳表ヘモジデリン沈着症の1例" 脳と神経. 49・10. 931-935 (1997)