1997 Fiscal Year Annual Research Report
マシャド-ジョセフ病におけるCAGリピートのex vivoDNA複製の不安定性
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09770450
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Research Institution | Saitama Medical University |
Principal Investigator |
金子 厚 埼玉医科大学, 医学部, 助手 (00224593)
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Keywords | Machado-Joseph病 / CAGリピート / リンパ球培養 / DNA複製 / instability |
Research Abstract |
MJD,SCA1,DRPLA等3塩基病において,CAGリピート数がDNA複製時に変化するか否か(CAGリピートinstability)を検討した.体外での細胞分裂の観察は比較的扱いやすいリンパ球を用いた.患者の培養リンパ球を敵宜増殖刺激し,その前後の培養細胞からゲノムDNAを抽出した.FITC標識プライマーにより各CAGリピートの領域を増幅,シークエンシングゲル上でリピート数をカウントした. 今回,5家系の5患者について,培養前と培養4日目,培養8日目,培養12目の4検体について検討した.採血リンパ球をカウントし,このうち半数をストック,残りをConAにより培養,4日目にリンパ球を回収しカウント,同様に半数を第1回目培養としてストック,残り半数を再度培養を行った.同様の手順で3回培養を行い,培養前後で各々4検体を得た.この(5患者+正常コントロール1名)×4検体すなわち24検体について各々DNA抽出し,MJD1プライマーでPCRを行った.シークエンシングゲル上では,正常アレルばかりでなく異常アレルも培養前後でのリピート数の変化を認めなかった.従来の検討は,ある固定した時間におけるいわば横断面の観察であり,今回はリンパ球に限ってではあるが体外でのDNA複製過程におけるCAGリピートのinstabilityを経時的な縦断面の観察である.これまでの報告から考えると,精巣以外の臓器細胞であるリンパ球では比較的CAGリピート数は安定しているものと予想されるが,今回の実験はそれを支持し,通常のDNA複製とspermatogenesisにおけるDNA複製とは根本的に異なったメカニズムが存在するものと思われる.
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Research Products
(7 results)
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[Publications] 金子厚, 北村邦男, 渋谷匡子他: "傍腫瘍性神経症候群患者血清にみられた抗phosphacan抗体の検討" 神経免疫. 6(1). 90-91 (1998)
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[Publications] Kaneko A, Narabayashi Y, Itokawa K et al: "A case of Machado-Joseph disease presenting spastic paraparesis" J Neurol Neurosurg Psychiatry. 62(5). 542-543 (1997)
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[Publications] 金子厚, 吉村和法, 田中健一他: "抗Hu抗体の神経細胞初代培養系における細胞障害の検討" 神経免疫. 4(1). 110-111 (1996)
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[Publications] 吉村和法, 金子厚, 坂井宏一郎他: "神経細胞に特異的なRNA結合蛋白質(Hu)を認識する自己抗体の解析" 神経化学. 35. 268-269 (1996)
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[Publications] Yoshimura K, Negishi T, Kaneko A et al: "Monoclonal antibodies specific to the integral membrane protein PO of bovine peripheral nerve myelin." Neurosci Res. 25. 41-49 (1996)
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[Publications] 金子厚, 錦織悦子, 今井明他: "乳癌で小脳失調を呈し、単一の40-kDa蛋白を認識する抗神経細胞抗体を認めた1例" 臨床神経. 35(3). 277-281 (1995)
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[Publications] 金子厚, 細川武, 北村邦男: "脱髄疾患,Bio Science用語ライブラリー(御子紫克彦編,脳神経)" 羊土社発行, 236-237 (1997)