1997 Fiscal Year Annual Research Report
アトピー性皮膚炎原因抗原の抗原性を決定するアミノ酸配列の同定と臨床への応用
Project/Area Number |
09770611
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Research Institution | Teikyo University |
Principal Investigator |
高橋 毅法 帝京大学, 医学部, 助手 (30282635)
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Keywords | アトピー性皮膚炎 / 抗ダニIgEモノクローナル抗体 / 特異抗原 / 抗原提示 / クローニング / Bリンパ芽球 / EBウイルス |
Research Abstract |
ダニに対するIgE抗体高値の患者末梢血リンパ球からEBvirusでトランスフォームしたBリンパ芽球様細胞株を作成してクローニングすることで抗ダニIgEモノクローナル抗体の作成にまず取り組んだ。総IgEが10000以上でダニに対するIgE scoreが5以上の患者を10人選んでBリンパ芽球様細胞株を作成いたものの当初考えていたELISPOTとパンニングを組み合せたスクリーニングは非特異的反応が想像以上に強いため効率良くIgE産生細胞を捕えられず、ELISA法にて培養上清中に相対的に高い抗体価を確認できるところまでは達するがクローニング中に急速に抗体価の低下を見るためモノクローナル抗体の作成がまだ成し得ていない。IgE抗体産生細胞を混ずる細胞株を幾つか保持しており現在もクローニングを続行中だが、始めてから既に8ヵ月が経過しており今後は効率よくクローニングしていく方法を検討する予定。抗ダニIgEモノクローナル抗体をアトピー性皮膚炎の患者から獲得したらダニの正確な抗原部位をアミノ酸配列として同定する。ウエスタンブロット法でバンドの出現する位置のタンパクを分取用タンパク電気泳動装置で取り出し、さらに抗ダニIgEモノクローナル抗体を付着させたアフィニティー・クロマトグラフィーで精製してアミノ酸配列を分析する。複数のエピトープが検出されれば米、麦など食事抗原部位との交差反応性、及びこのエピトープが実際に臨床的にも意義があるか否かも肥満細胞との反応性などで更に検討する予定。
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