野菜の発癌予防効果のメカニズムに関する蛋白化学的研究

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09877417
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 丹羽 峰雄 徳島大学, 薬学部・附属医薬資源教育研究センター, 教授 (30263867)
• Keywords: チトクロムP450 / 遺伝子組換え / 発癌 / 酵素阻害

Research Abstract

発癌の予防には発癌前駆物質がP450による酸化的代謝を受けるのを阻害し、発癌物質の生成を抑えればよい。野菜の成分によるP4501A1,1A2の不活性化を標的とし、酵素蛋白化学的にその不活性化機構を解明し、さらにより選択的でより有効なP450不活性化剤を探索開発し、最終的にはそれによる難治性癌の肺癌予防薬開発を目的として研究を進めている。
本研究の材料であるP4501A1,1A2の大量調製のために、組換え大腸菌による高発現系を確立した。すなわちP450蛋白質のN末端の膜アンカー部分の約20残基を除き、N末端アミノ酸をアラニンに変えたP450遺伝子をT7プロモーターを用いる高発現ベクターとして構築し、約100nmole/L以上の高産生でP4501A2を得た。産生されたラットP4501A2△2-24は、イオン交換カラムクロマトにより精製し、ほぼ単一にまで精製されたことをSDS-PAGE、イムノブロットにより確認した。精製したP4501A2△2-24は、エトキシクマリン脱エチル化活性測定により、その酵素活性を維持していることを確認した。さらに、その酵素活性はPhenethyl isothiocyanate(PEITC)により、濃度依存的に阻害されることを確認した。
得られた精製P4501A2△2-24を用いて、酵素蛋白化学的にその不活性化機構の解明へと研究を進めている。