2009 Fiscal Year Annual Research Report
酵母Yarrowia lipolyticaのアルカン誘導性転写制御機構の解析
Project/Area Number |
09J05615
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
小林 哲 The University of Tokyo, 大学院・農学生命科学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | 疎水性物質に対する応答 / アルカンの分解 / 遺伝子発現制御 / Yarrowia lipolytica |
Research Abstract |
アルカン資化性酵母Yarrowia lipolyticaにおいて、アルカン応答の最下流部分の分子機構は明らかになりつつあるが、アルカンがどのように細胞に認識されるのかは不明である。アルカン応答の負の転写制御因子であるYas3pがアルカンの存在により局在を変化させることから、Yas3pの局在変化の分子機構を解明することで、アルカン応答の上流部分の分子機構を明らかにできると考え、以下の実験をおこなった。 1.Yas3pのリガンドの探索アルカン存在時にYas3pが小胞体に局在することから、小胞体にリガンドが存在すると考え、精製したYas3pとBiacoreあるいはprotein lipid overlay assayを用いてその探索をおこなったところ、アルカンやその代謝産物ではなく、膜脂質であるホスファチジン酸(PA)がリガンドであることが示唆された。また P450ALKの発現量が、PAホスファターゼ遺伝子を破壊すると増加し、ホスファチジルコリンからPAを生産するホスフォリパーゼ遺伝子の破壊により減少したことから、実際に細胞内でPAの量がP450ALKの発現に影響することも示唆された。以上の結果から、アルカン応答と膜脂質との関連性が明らかとなった。 2.Yas3p変異体の解析 Yas3pの機能を解析するためにYAS3遺伝子にランダムに変異を導入し、アルカン応答に欠損のある変異体を取得した。その変異体Yas3pの局在および塩基配列を調べたところ、アルカン存在時の小胞体への局在に重要であると考えられる領域がYas3pの配列中に2ヵ所見出された。また、アルカンに過剰に応答する変異体や、アルカン応答が恒常的に起こる変異体も取得した。今後、これらの変異体の解析をおこなうことでYas3pのさらなる機能の解明が可能である。
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Research Products
(2 results)