2009 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
09J05638
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Research Institution | Hokkaido University |
Principal Investigator |
細田 弥生 Hokkaido University, 大学院・獣医学研究科, 特別研究員(DC1)
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Keywords | コンディショナルノックアウト / チロシン硫酸化 / TPST / 甲状腺機能低下症 / QTL解析 |
Research Abstract |
翻訳後修飾のひとつであるチロシン硫酸化反応の生物学的意義は未だ不明な点が多い。哺乳類のチロシン硫酸化反応はTyrosylprotein sulfotransferase 1と2(TPST1とTPST2)による触媒を受けており、生命現象におけるチロシン硫酸化の意義を示す手段として、時期ないし組織特異的な両遺伝子のコンディショナルノックアウトマウスの知見は必要不可欠である。 コンディショナルノックアウトマウスを作製するためにBAC recombineering systemを用いて相同組換え用のターゲティングベクターを作製した。このターゲティングベクターをES細胞にエレクトロポレーション法を用いて導入した結果、TPST1 KOにおいて8個、TPST2 KOにおいて15個のneo耐性コロニーが得られた。現在PCR法とサザンハイブリダイゼーション法を用いて相同組換えを確認中である。次年度はこのES細胞を8細胞期胚に移植することによりキメラマウスを作製する。 また、本研究の一部としてTpst2遺伝子の自然発症変異を有するDW/J-grtマウスも対象に研究を行っているが、このマウスの異常症状である甲状腺機能低下症(CH)が遺伝的背景の影響を強く受けることを発見した。即ち、遺伝的背景がDW/JあるいはC57BL/6Jの時はTpst2遺伝子のgrt変異に伴うCH症状が強く現れるが、遺伝的背景を129系統に置換すると症状が殆ど現れなかった。129系統は多くのマウスES細胞に用いられていることから、この現象は極めて重要である。そこでこの原因を明らかにするためgrt変異を有するDW/J系統と129系統の間で交配を行い、CHに伴う体重低下を指標にquantitative trait loci(QTL)解析を行った。その結果、主な原因遺伝子座は第2染色体上に存在することが明らかとなった。現在、その責任遺伝子の同定を試みている。
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Research Products
(2 results)