2000 Fiscal Year Annual Research Report
細胞骨格蛋白質遺伝子欠損による心筋症の病態解明と新しい遺伝子薬物療法の開発
Project/Area Number |
10307017
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
豊岡 照彦 東京大学, 保健管理センター, 教授 (00146151)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
申 偉秀 東京大学, 保健センター, 助手 (10211971)
鈴木 順一 東京大学, 保健センター, 講師 (50260485)
上原 誉志夫 東京大学, 保健センター, 助教授 (40184965)
河田 登美枝 新潟大学, 病院, 薬剤部・助教授 (00186107)
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Keywords | 心筋症 / 遺伝子治療 / サルコグリカン / AAVベクター / 予後 |
Research Abstract |
ジストロフィン関連糖蛋白複合体(DAGC)は細胞膜直下のジストロフィンと細胞外マトリクスのラミニン-α2を結合し、細胞膜を安定化する。当研究室では心筋症ハムスターでDAGCの中のδ-サルコグリカン(SG)遺伝子の欠損を証明した。昨年ヒトの心筋症家族でハムスターと同じδ-SG遺伝子の欠損による重症心不全症例が報告され、共通の病態が示された。更に筆者らは遺伝子治療の為に最初HVJリポソームベクターを用いて生体内の心筋細胞に数種の遺伝子を発現させたが、このベクターは生体に無害な反面、発現期間が短く、長期治療には適さず、新しいベクターの開発が必要となった。種々のベクターを模索した結果、安全性、発現効率、発現期間共に優れている事が報告されているrAAVに注目し、CMVプロモーターの下流にレポーター遺伝子(Lac Z)、又は正常配列のδ-SG遺伝子を含むrAAVベクターを作成した。5週令の雄性TO-2系ハムスターにLac Z単独、又はLac Zと正常配列のδ-SG遺伝子を左室心尖部筋層に投与した。10-30週後に心を分離し、Northern blotting,Western Blottingおよび病理学的、免疫組織学的検索に供した。また一部の動物は心臓カテーテル検査による血行動態、心エコー検査によりin vivoの収縮能を測定した。更に44匹の動物を2群に分け、TO-2の生存期間を越える40週後まで予後を追跡した。その結果、I.Northern blottingの結果TO-2にδ-SGのmRNAが認められ、Western Blottingでも正常動物と同じ分子量のδ-SG蛋白を認めた。II.rAAVによる遺伝子発現効率は投与部位で約40%と優れていた。またその発現は40週まで認められ、ほぼ生涯発現する事も示された。またこの時、予後も明らかに改善した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Hikiji H et al.,: "Peroxynitrite production by TNF-α and IL-1β."Am.J.Physiol.. 278. E1031-E1037 (2000)
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[Publications] Wang YP et al.,: "Autocrine action and its underlying mechanism..."J.Biol.Chem.. 275. 28739-28749 (2000)
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[Publications] Shin WS et al.,: "A homoplamic mitochondrial DNA mutation..."Am.J.Hum.Gen.. 67. 1617-1620 (2000)
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[Publications] Xi H et al.,: "Dystrophin disruption might be related to......"J.Cardiovasc.Pharmacol.. 36. S25-S29 (2000)
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[Publications] Suzuki J et al.,: "Screening and/or follow-up with........"Radiology. 6. 189-197 (2000)
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[Publications] Wang YP et al.,: "Crucial role of type 1, but not type 3,........."Circ.Res.. 88. 202-209 (2001)