1998 Fiscal Year Annual Research Report
神経系由来培養細胞におけるテトラヒドロビオプテリン生合成調節機構の解析
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10670050
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
太田 明 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (10247637)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森 啓至 藤田保健衛生大学, 医学部, 助手 (40239596)
中島 昭 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (20180276)
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| Keywords | 神経芽細胞腫 / テトラヒドロビオプテリン / 一酸化窒素 / 一酸化窒素合成酵素 / リポポリサッカライド / GTPシクロヒドロラーゼI / 腫瘍壊死因子-α |
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| Research Abstract |
#1. 一酸化窒素(NO)合成酵素(NOS)サブタイプのmRNAレベルの検討
NOSはテトラヒドロビオプテリン(BH_4)を介するdimerとして機能し、マクロファージ(Mφ)においてはリボポリサッカライド(LPS)の刺激によって活性化することが知られているので、神経系由来培養細胞であるマウス神経芽細胞腫N1E-115細胞においても、Mφ同様、LPSによりNOS mRNAレベルが変動するか否かを検討した。NOSの三種のサブタイプiNOS、eNOS、nNOSそれぞれにつき特異的なプローベを用いてreverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)を施行し、N1E-115細胞においてはiNOS並びにnNOSをコードするmRNAが同定され、塩基配列によっても確認された。nNOS mRNAレベルは本細胞において多く発現しているが、LPS刺激による影響を受けなかった。これに対し、iNOS mRNAはLPS刺激により始めてRT-PCRにて確認され、その発現量の増加が証明されたが、その発現レベルはnNOS mRNAレベルに比し極めて少量であり、LPS刺激によるiNOS活性の増大が生理的に有意なNO産生に至っているとは考えにくいと結論された。
#2. 細胞膜脱分極に伴うBH_4含有量とその合成系の律速酵素GTPシクロヒドロラーゼI(GCH)活性の変動細胞膜脱分極に伴いGCHが細胞質より細胞膜へ移動すること、並びにGCHがリン酸化されるという報告が有る.この知見を基に、マウス神経芽細胞腫細胞N1B-115を高カリウム溶液刺激にて脱分極させたが、細胞内BH_4含有量とGCH活性には有意な変化は生じなかった。
#3. 腫瘍壊死因子-α(TNF-α)刺激によるBH_4含有量とその合成系の律速酵素GCH活性の変動N1E-115細胞をTNF-αにて刺激することにより細胞内BH_4含有量とGCH活性が増大した。
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[Publications] Takahide Nomura et al.: "Enzymes related to catecholamine biosynthesis in tetrahymena pyriformis. Presence of GTP cyclohydrolase I" Comparative Biochemistry and Physiology. 120B・4. 753-760 (1998)
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[Publications] Akira Nakashima et al.: "Dopamine inhibition of human tyrosine hydroxylase type 1 is controlled by the specific portion in the N-terminus of the enzyme" Journal of Neurochemistry. in press. (1999)
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[Publications] Miyuki Ota et al.: "Risperidone, an atypical antipsychotic, affects the mRNA expressions of monoamine oxidase type B and vesicular monoamine transporter-2 in rat brain" Biogenic Amines. in press. (1999)
