1998 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト臍帯内皮初代培養細胞がVero毒素に抵抗性を獲得する機序について
Project/Area Number |
10670274
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Research Institution | Aichi Medical University |
Principal Investigator |
吉田 友昭 愛知医科大学, 医学部, 助教授 (70210705)
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Keywords | ヴェロ毒素 / 血管内皮 / アポトーシス / 溶血性尿毒症症候群 / 腸管出血性大腸菌 |
Research Abstract |
腸管出血性大腸菌O157感染による溶血性尿毒症症候群(HUS)の発症に重要な鍵となる、ヴェロ毒素(Stx-1/-2)による血管内皮の傷害を観察検討するため、ヒト由来の血管内皮細胞を用いたin vitroでの実験系を確立し、内皮細胞の傷害されるメカニズムを解明するとともに、傷害を抑制する手段を探って治療に応用することを目的にしている。昨年度は以下のことを明らかにした。(1)ヒトの臍帯静脈内皮細胞、臍帯動脈内皮、大伏在静脈内皮のいずれも、初代培養ではStx-1/-2にVero細胞と同等の高い感受性を示し(CD_<50>:0.5〜10pM)、その細胞傷害はannexin V陽性、TUNEL陽性の細胞種の出現を伴うapoptosisであった。(2)その高感受性は内皮細胞の継代期間を経ると急速に減少し、どの細胞系でも継代2週間後には1000倍以上の濃度のStxにも抵抗性を示すとともに、さらに高濃度のStxで傷害を誘導してもapoptosisは観察されなかった。このようなStx-1/-2に対する抵抗性は、従来のデータに一致していた。(3)Stx-1の結合量は継代とともに減少していたが、その変化の程度は約1/10でありこのような抵抗性を説明できるものではなかった。(4)Apoptosisに関与する分子のうち、caspaseの中では-8と-3が有意に増強していたが-1は変化が見られなかった。(5)Apoptosisを抑制するBcl familyの分子のうち、Bcl-xLが継代を経た細胞において増加していた。(6)Stxはリボゾームレベルでタンパク合成を阻害することが解っている。2.5μg/mlのcycloheximideは30pMのStx-1より強く内皮細胞のタンパク合成を抑制するにもかかわらず、18時間培養してもapoptosisの所見は認められなかったことから、タンパク合成阻害以外の機序の関与が示唆された。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] A.Morikawa,: "Altered expression of constitutive type and inducible type heat shock proteins in response of D-galactosamine-sensitized mice to lipopolysaccharide as an experimental endotoxic shock model." FEMS Immunol.Med.Microbiol.21. 37-45 (1998)
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[Publications] T.Sugiyama,: "Generation of Escherichia coli O9a serotype, a subtype of E.coli O9, by transfer of the wb^* gene cluster of Klebsiella O3 into E.coli via recombination." J.Bacteriol.180. 2775-2778 (1998)
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[Publications] G.Z.Jiang,: "Role of CD86 (B7-2) in triggering of antigen-specific IgE antibody response by lipopolysaccharide." FEMS Immunol.Med.Microbiol.21. 303-311 (1998)
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[Publications] N.Paeng,: "Experimental murine model for autoimmune enterocolitis using Klebsiella pneumoniae O3 lipopolysaccharide as a potent immnological adjuvant." Microbiol.Immunol.43. 45-52 (1999)
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[Publications] A.Morikawa,: "Role of nitric oxide in lipopolysaccharide-induced hepatic injury in D-galactosamine-sensitized mice as an experimental endotoxic shock model." Infect.Immun.in press. (1999)