1999 Fiscal Year Annual Research Report
日本人に特有な、血清コリンエステラーゼ変異遺伝子の発現とその性状に関する研究
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10672187
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Research Institution | Jikei University School of Medicine |
Principal Investigator |
須藤 加代子 東京慈恵会医科大学, 医学部・臨床検査医学, 講師 (90115486)
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Keywords | 血清コリンエステラーゼ / 変異遺伝子 / 遺伝子発現 / ミッセンス変異 / 293 cell / 発現ベクター / フッカソーダ耐性 / 一塩基置換 |
Research Abstract |
我々は今年までにwild typeのヒトChEcDNAを組み込んだpRc/CMVベクターDNAを大腸菌に導入し、さらにL330I変異体を作成しそれらの組み換え体を確立した。発現ChEはヒト胎児腎臓細胞(293;American Culture Collection CRL 1573)を用いて確認した。Wild体発現ChE(rUU)は正常血清のそれと、変異発現ChE(r330I)はL330I変異のホモ接合体の血清中の性状とほぼ同様であった。これらの結果よりコドン330におけるTTAからATAという一塩基置換のみにより活性の低下・ジブカイン耐性・フッ化ソーダ耐性というF型の表現型を示すことを証明した。また基質としてPropionylthiocholine iodide(PTCI),Acetylthiocholine iodide,Butylylthiocholine iodideを用いて動力学的性状を解析しKm,Ki値の増加は、PTCIを基質とした場合に最も顕著であり、他の基質では、この変異の推定は困難であることを報告した。 本年度は、コドン330における他のミッセンスの変異2種(GTA;Val,TCA;Ser)の変異体を作成し、r330Vおよびr330Sを発現することが出来た。r330I,r330V,r330SのChE活性はrUUのそれの48,36,65%であり、DNは92,94,88%,FNは86,89,89%といずれもrUUに比較し低下していた。これらの結果から、コドン330のロイシンは活性発現及び阻害剤耐性に関与する重要なアミノ酸であることが示された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] 須藤 加代子: "血清コリンエステラーゼ遺伝子のコドン330のアミノ酸置換発現酵素の性状"生物物理化学. 45・補2. 33 (1999)
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[Publications] Kyoko SUDO: "Enzyme kinetic studies of the recombinant human butyrylcholinesterase330I"Clin. Chem. Lab. Med.. 37・suppl.. 475 (1999)
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[Publications] 秋月 摂子: "種々の基質を用いて測定したL330I変異リコンビナント血清コリンエステラーゼのDloucaine(N),Fluride N"臨床病理. 47・5. 479-480 (1999)
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[Publications] 須藤 加代子: "遺伝子変異解析における電気泳動法-PCR(polymerase chain reaction)法・ミスマッチPCR法-"生物物理化学. 43・1. 1-7 (1999)
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[Publications] 須藤 加代子: "高コリンエステラーゼ血症の検査"臨床検査. 43・5. 583-584 (1999)
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[Publications] 須藤 加代子: "臨床検査技術学 17 遺伝子検査学"医学書院. 150 (1999)