1998 Fiscal Year Annual Research Report
グリア細胞分化に伴う血液脳関門の制御とグリア由来制御因子の同定
Project/Area Number |
10770680
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Research Institution | Yamaguchi University |
Principal Investigator |
安達 直人 山口大学, 医学部, 助手 (70263788)
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Keywords | 血液脳関門 / in vitro モデル / グリア / 分化 / グリオーマ / 遺伝子治療 |
Research Abstract |
目的 目的はグリア分化と血液脳関門の関連をin vitroモデルにより生理学・分子生物学的に検討し、遺伝子治療における遺伝子導入法の改善に役立てることである。 成果 1.in vitro血液脳関門モデルの作製と検定 1)血液脳関門モデル作製(ラットとマウス):コラーゲンPTTE膜上下2重単層培養法により脳微小血管内皮細胞(初代培養)と新生児アストロサイト(初代培養)による脳関門モデルを作製した。2)モデル検定:細胞純度は95%以上、細胞数は1×10_5/1cm^2、細胞比は1:1、モデル培養時間は24時間と設定確立した。3)形態解析:光学・電子顕微鏡によりTight Junctionの再構築、免疫染色により内皮特異的マーカーvWB陽性を確認した。3)サイトカインおよび浸透圧剤の効果検討:サイトカイン(IL-1b、IFNg、TNFa)は関門を開放し、特にTNF-aで最も減弱(60%増)した。浸透圧剤マンニトールでも急性期に関門が開放(250%増)した。4)血液脳関門構成膜蛋白分子と予想されるNeuroliginのcDNAをラットにて単離同定した。2.グリア細胞の分化による腫瘍関門の制御機能 1)_3H-Inulin、_<125>I-Albuminによるトレーサー分子の膜透過性と膜電気抵抗度(TEER)ではアストロサイトにより内皮細胞間の結合が40%増強した。2)FACS解析ではZO-1、Occludinの発現が約2倍増加した。ICAM-1、VCAM-1の発現には影響を及ぼさなかった。この結果はアストロサイトは内皮結合分子を特異的に制御している可能性を示唆する。 3.外来遺伝子(HSV-TK)導入による変化 ベクター産生細胞GLI-328(PA317/G1Tk1SvNa7)の内皮細胞への感染効率を検定中である。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Frei K: "Ex vivo glioblastoma cells are sensitive to Fas(CD95/Apo1) ligand" J.Neuroimmunology. 87. 105-113 (1998)
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[Publications] Naoto Adachi: "HSV-TK/GCV gene therapy in relapsed glioblastoma multiforme" Gene Ther.Mol.Biol.2. 380-381 (1998)