1999 Fiscal Year Annual Research Report
核内ステロイドレセプターによる性ステロイドホルモン様化合物評価系の構築
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11556065
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
加藤 茂明 東京大学, 分子細胞生物科学研究所, 教授 (60204468)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
四釜 久隆 山之内製薬株式会社, 薬理研究所, 室長(研究職)
柳澤 純 東京大学, 分子細胞生物科学研究所, 助手 (50301114)
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| Keywords | 性ステロイドホルモン様化合物 / ホルモン関連化合物 / ステロイドホルモンレセプター / 共役転写因子群 / 転写促進領域 / ERα・ERβ / AR / クロマチン構造 |
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| Research Abstract |
核内レセプターの共役因子群が性ステロイドホルモン及び関連化合物の活性を規定すると考えられる。そのための共役因子とレセプターの相互作用に影響を与える化合物は、結果的に性ホルモン作用を撹乱する。従って、本研究では、核内レセプターに基づいた性ホルモン評価系を、分子生物学的手法に基づき動物細胞内での構築を試みた。具体体的には、下記の3点に焦点を当て、研究を進めた。
1.性ステロイドレセプターと転写共役因子群とのin vitro相互作用を利用した性ステロイドホルモン様化合物の評価系:転写制御因子である性ステロイドレセプターには、2つの転写促進領域が、レセプター分子N末端、C末端に存在する。本年度は2種のヒト女性ホルモンレセプター(ERα、ERβ)と男性ホルモンレセプター(AR)のAF-2と、SRC-1、TIF2とのリガンド結合依存的な相互作用を検出するin vitro GST pull-down系を構築し、この2者相互作用を誘導もしくは阻害を測定することで、ホルモン様活性の迅速な評価を試みた。
2.転写促進能を利用した性ステロイドホルモン様化合物の高感度生物検定法:1で評価されたステロイドホルモン様化合物が生物活性を有するか否かを、更にステロイドレセプターの転写促進能で検定することで生物検定法とする。ERα、ERβ、ARのAF-2とGAL4DNA結合領域とのキメラタンパクを発現させ、GAL4との結合評価系有するリポーター遺伝子(ルミフェラーゼ)系で、リガンドの転写促進能を調べた。
3.性ステロイドホルモン活性を規定するレセプター共役因子の同定:性ステロイドレセプター種(ERα、ERβ、AR)固有の共役因子の検索・同定を、酵母two-hybrid法を用いたcDNAスクリーニング、及び生化学的手法を用いて行った。この時第一には転写を促進する因子群の同定を目指したが、同時にクロマチン構造を制御する因子や、細胞周期を制御する因子などの同定も試みた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Kobayashi.Y.,Kato.S.,et al.: "p300 mediates functional synergism between AF-I and AF-2 of estrogen receptor α and β by interacting directly with the N-terminal A/B domains"J.Biol.,Chem.. in press. (2000)
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[Publications] Fuse.H.,Kato,S.,et al.: "Characterization of transactivational property and coactivator mediation of rat mineralocorticoid receptor AF-1"Mol.Endocrinol.. in press. (2000)
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[Publications] Tai,H.,Kubota,N.,Kato,S.: "Involvement of nuclear receptor coactivator SRC-1 in estrogen-dependent cell growth of MCF-7 cells"Biochem.Biophys.Res.Commun.. in press. (2000)
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[Publications] Yanagisawa,J.,Kato,S.,et al.: "Convergence of TGF β and vitamin D signaling pathways on SMAD proteins acting as common transcriptional co-activators"Science. 283. 1317-1321 (1999)
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[Publications] Takeyama,K.,Kato.S.,et al.: "Selective interaction of vitamin D receptor with transcriptional coactivators by a vitamin D analog"Mol.Cell.Biol.. 19. 1409-1055 (1999)
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[Publications] Sekine,K.,Kato,S.,et al.: "FGF10 is essential for the limb and lung formation"Nature Genetics. 21. 138-141 (1999)
