2000 Fiscal Year Annual Research Report
DNAマイクロチップを用いた疾患別多次元遺伝子多型解析法の開発
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11557202
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| Research Institution | Tokushima University |
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Principal Investigator |
宮本 賢一 徳島大学, 医学部, 教授 (70174208)
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| Keywords | ビタミンD受容体 / DNA analysis / 骨粗鬆症 / 遺伝子多型 / 骨密度 |
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| Research Abstract |
本研究では、骨代謝に関連するアミノ酸トランスポーターのいくつかを発現クローニング法にて同定し、遺伝子多型部位を同定した。また骨粗鬆症関連遺伝子(ビタミンD受容体、VDR,)において、多型を示す新しい部位を同定した。新たな多型部位は、VDR遺伝子の、腸管特異的発現を規定する領域に存在した。遺伝子解読を行い、多型を3つのタイプに分類した。さらに、岡山県立大学のチームは、本多型と骨密度との間に、有意な相関関係を見出した。この遺伝子多型の生理学的重要性を説明する目的で、転写調節領域に多型部位を挿入し、その機能を小腸培養細胞モデルであるCaCO2細胞に、トランスフェクトし、その発現調節に及ぼす影響について検討し、その重要性を明らかにした。次に、遺伝子多型の解析用DNA断片を合成した。この際、多型を示す部位が、認識されやすいように、前後に新規の配列を挿入した。新規配列プローブは増幅プライマーを考慮しデザインされ、片方の3'末端にはドナー蛍光色素を標識し、その隣接のプローブの5'末端にはアクセプター蛍光色素を標識した。しかし蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を用いたDNAチップ型のハイブリダイゼーション法では、従来のSSPCやDNAシークエンス法に比べ、再現性に乏しく信頼度の高いデータを得るためには、アクセプター蛍光色素の改良にさらなる検討が必要と判定された。今後、FRET用いたより正確なプライマー設計を行い、本法をより感度の高いものに改良する必要がある。
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[Publications] Uemura H.: "Close correlation between estrogen treatment and renal phosphate reahsorption capacity"J.Clinic.Endoc.Metab.. 85. 1215-1219 (2000)
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[Publications] Kanai Y.: "Transport properties of a system y+L neutral and basic amino acid transporter : Insights into the mechanisms of substrate recognition."J.Biol.Chem.. 275. 20787-20793 (2000)
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[Publications] Miyamoto K.: "Identification and function analysis of three isoforms for the Na+-dependent co-transporter (NaPi-2) in rat kidney."Nephrol.Dial.Transplant.. 15. 31-33 (2000)
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[Publications] Miyamoto K.: "Secondary hyperparathyroidism and phosphate sensing in parathyroid glands."J.Med.Invest.. 47. 118-122 (2000)
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[Publications] Takeda E.: "Molecular mechanisms of mammalian inorganic phosphate homeostasis."Advan.Enzyme.Regul.. 40. 285-302 (2000)
