1999 Fiscal Year Annual Research Report
大量高速マスシークエンシング技術の確立と蛋白質リン酸化のプロテオーム解析
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11558082
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
谷口 寿章 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教授 (10257636)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松原 守 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (90288481)
千谷 晃一 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (60179942)
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| Keywords | 質量分析 / プロテオーム解析 / ゲノム解析 / 翻訳後修飾 / 蛋白質リン酸化 / シグナル伝達 |
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| Research Abstract |
本研究においては、1)二次元電気泳動ゲルに含まれるスポットを、超高感度ナノスプレー質量分析法により得られるペプチドの部分シークエンスを含む情報のみから、ゲノムデータベース上で一義的に蛋白質を同定するマスマッピング法を確立すること、2)リン酸化やアセチル化、糖鎖付加などを特異的に検出する手段を確立し、プロテオーム解析をさらに翻訳後修飾データベースを含む形に拡大する事、3)さらにそれらを用いて、神経細胞のシナプスなどシグナル伝達系蛋白質が集中した、機能複合体としての細胞画分のプロテオーム解析を行うことで、シグナル伝達に関わる未知蛋白質の機能を組織的に明らかにする手法を確立することを目的とする。本年度においては、その内、(1)と(2)について主に研究開発を行った。テーマ(1)については、二次元電気泳動ゲルを銀染色し、観測されたスポットを切り出し、MALDI-TOFによるペプチドフィンガープリンティング法により、ゲノムデータベース上で検索するシステムを確立した。大量試料を迅速に処理するため、本研究で購入した試料処理ロボットを用い、試料の脱塩からMALDI-TOF用のサンプルターゲットに自動塗布するシステムを開発した。テーマ(2)に関しては、当研究所所有の三連四重極型質量分析計を用い、いわゆるペアレントスキャン法によるリン酸化ペプチド検出システムを確立することに成功した。今後は、アセチル化など、他の翻訳後修飾を検出するシステムを確立すると共に、試料調整、測定、データ解析の自動化による、ハイスループット解析システムの確立を目指す。
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[Publications] Uedaira, H., et al.: "Domain organization of flagellar hook protein from Salmonella typhimurium"FEBS Lett.B. 421. 203-207 (1999)
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[Publications] Takasaki, A., et al.: "Identification of the calmodulin-binding domain of neuron-specific protein kinase C substrate protein CAP-23/NAP22 : Direct involvement of protein myristoylation in calmodulin-target protein interaction"J. Biol. Chem.. 274. 11848-11853 (1999)
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[Publications] Manenti, S., et al.: "Phosphorylation of the myristoylated PKC substrate MARCKS by the cyclin E-Cdk2 complex in vitro"Biochem. J.. 340. 775-782 (1999)
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[Publications] Taniguchi, H.: "Protein myristoylation in protein-lipid and protein-protein interactions (Review)"Biophys. Chem.. 82. 129-137 (1999)
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[Publications] 谷口寿章: "質量分析法のたんぱく質構造解析への応用とプロテオーム解析"実験医学. 17. 2550-2554 (1999)
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[Publications] Yamauchi, E. and Taniguchi, H.: "Neural development (Uemura, K. Kawamura, K. and Yazaki, T., eds.)"Springer-Verlag, Tokyo. 416-420 (1999)
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[Publications] Yamauchi, E., et al.: "Neural development (Uemura, K. Kawamura, K. and Yazaki, T., eds.)"Springer-Verlag, Tokyo. 421-424 (1999)
