C型肝炎ウイレス構造領域遺伝子の肝癌発生機序に関する研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670492
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 高瀬 幸次郎 三重大学, 医学部, 助教授 (00163204)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 古坂 明弘 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (00266678) ; 白木 克哉 三重大学, 医学部, 助手 (90263003) ; 伊藤 正明 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00223181)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / 肝癌

Research Abstract

本年度はまず研究計画に従い以下の結果を得た。
HCVコア蛋白の標的蛋白質の検索
C型肝炎患者のHCV遺伝子をクローニングしコア領域の遺伝子を解析した。そのHCVコア遺伝子をpAS-2ベクターに組み込み、その結合蛋白をヒトリンパ球cDNAライブラリーより、yeastを用いたtwo-hybrid法を用いて現在クローニング中である。いくつかの陽性クローンを確認している。さらに、コア蛋白のC末端を欠損させたvectorを作成し同様にtwo-hybrid法にて陽性クローンのスクリーニングを施行している。現在まで約20個のクローンを同定した。
これらのクローンの解析にて、免疫やアポトーシスに関する新たな遺伝子のクローンの同定に成功している。その一つがTIMP-1(tissue inhibitor of metalloprotease-1)であった。TIMP-1は慢性肝炎における肝線維化、および肝発癌にも深く関係しているとされている。
そこで、次にTIMP-1とHCVコア遺伝子のin vitroでの結合を確認するために、それぞれのvectorのdeletion mutantを作成中である。このvectorを用い、免疫沈降法にて結合を確認している。また、リコンビナント蛋白を作成しpull down assayにても結合を確認する予定である。
また、上記方法を用いてさらに、結合クローンをスクリーニングする予定である。
また、現在までHCVコア蛋白発現Tgマウスでは発癌はみられていない。