2000 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
11694328
|
|---|
| Research Institution | Hyogo University |
|---|
Principal Investigator |
鬼頭 昭三 兵庫大学, 附属研究所, 教授 (00010140)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
本澤 真弓 兵庫大学, 短期大学部・食物栄養学科, 教授 (00132374)
野村 靖幸 北海道大学, 薬学部, 教授 (00034041)
遠山 正彌 大阪大学, 医学部, 教授 (40028593)
新郷 明子 兵庫大学, 附属研究所, 講師 (50309499)
|
|---|
| Keywords | 海馬 / H19-7細胞 / IGF-1 / estrogen / tamoxifen / ICI182,780 / cAMP / Caion |
|---|
| Research Abstract |
ラット胎仔海馬細胞を不死化させたH19-7細胞を用いて実験を行った。まず、H19-7細胞を神経細胞に分化させるめに次の方法を行った。functional SV40 T antigenの発現を除去するために培養温度を39℃に上げてN2 supplementとbFGFを含んだ低濃度血清の培地で2日間培養し、神経突起を伸長した分化神経細胞を得た。神経細胞様に分化しH19-7細胞にβ-estradiol 10^<-9>Mを加えることにより、IGF-1mRNAの発現が優位に増強することがRNase protection assayによって認められた。estrogenによるIGF-1mRNAの誘導は核内estrogen受容体のpartial antagonistであるtamoxifen添加によっては抑えられなかった。
一方では、分化H19-7細胞にβ-estradiolを加えることによりestrogenの核内受容体(ER)mRNA発現に与える影響を、RNase protection assayによって観察した。estrogen 10^<-9>Mの単独添加はestrogen核内受容体mRNAの発現を有意に増強させた。即ちestrogenはERに対してup-regulationを示すことがわかった。このestrogenによるERのup-regulationはtamoxifenによっては影響を受けず、ICI182,780によって阻止された。
また、分化H19-7細胞にβ-astradiolを加えることにより、即時性且つ一過性の細胞内Caion濃度の上昇が起こることをfura2fluorometryによって確認した。この現象は、estrogenの細胞膜受容体の存在を示唆するものである。estrogenの細胞膜受容体は、リガンド依存性にG蛋白と共役してcAMPを上昇させ、cAMP-gated channelを介してCaion濃度の上昇が起こるものと推定される。そこで、ARGUS/HiSCA(浜松ホトニクス)を用いて分化H19-7細胞について蛍光PKA指示薬としてDR2を用い、工藤らの方法によって細胞内PKA活性の動きを観察した。その結果、estrogenを加えると即時的に細胞内PKA活性の上昇が起こることを確認した。また、分化H19-7細胞にestrogenを加えることにより、IGF-1mRNAの誘導と共に、AP-1及びCREB結合活性の上昇をgel shift assayによって、GAP43 mRNA発現の誘導をRNase protection assay及びreal time PCRによるRNA解析によって認めた。また、これらIGF-1 mRNA発現の誘導、CREB及びAP-1結合活性の上昇、GAP43 mRNA発現の誘導はICI182,780の同時投与によって抑えられた。
|
Research Products
(7 results)
-
[Publications] Shingo,A.S.: "Nicotine inhibits estrogen response element binding in the rat brain."Journal of Neural Trauasmission. 107. 1491-1495 (2000)
-
[Publications] 鬼頭昭三: "エストロゲンが老人性痴呆の発症を抑えるのはなぜか"医学のあゆみ. 195(6). 427-428 (2000)
-
[Publications] 鬼頭昭三: "何故、nicotineは海馬neuronに対して有利に働くか?-in vitro実験的研究-"平成11年喫煙科学研究財団研究年報. 635-640 (2000)
-
[Publications] Kito,S.: "Effects of nicotine on hippocampal neurons in relation with receptor subunits."30^<th> Annual Meetinag Society for Neuroscience Abstracts. 25,part2. 1370 (2000)
-
[Publications] Shingo,A.S.: "Mechanisms of estrogen-induced IGF-1 mRNA expression in hippocampal neurons."30^<th> Annual Meeting Society for Neuroscience Abstracts. 25,part2. 1914 (2000)
-
[Publications] Shozo Kito: "Effects of nicotine on hippocampal neurons"The Japanese Journal of Pharmacology. 85,Supplement I. 231 (2000)
-
[Publications] Akiko Shingo: "Mechanisms of estrogen-induced IGF-1 mRNA expression in hippocampal neurons."The Japanese Journal of Pharmacology. 85,Supplement I. 274 (2000)
