1999 Fiscal Year Annual Research Report
多因子遺伝性循環器疾患の遺伝子解析へのDNAチップ技術の応用
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11877119
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
荻原 俊男 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (60107042)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
勝谷 友宏 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30311757)
檜垣 實男 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (70189744)
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| Keywords | 遺伝子多型 / マイクロアレイ / 疾患感受性 / SNPs / 高血圧 / TaqMan / プローブ / ASO |
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| Research Abstract |
本研究では、『生活習慣病の遺伝子多型解析のための技術革新』を目的とし、大量検体を迅速、正確、安価に処理できる技術の確立を目指している。本年度は共同研究施設への DNA マイクロアレイ装置の導入が見送られたため、TaqMan ケミストリー法を応用したASO(allele specific oligonucleotiide hybridization)による半自動遺伝子型決定法を確立した。本法では、プライマーとプローブの設計と、至適温度条件の設定が最も重要であり、極端にGC rich な領域や単塩基の連続した配列には不向きであることも判明した。しかし、ゲル電気泳動が不用で、制限酵素処理も必要としないことから、本法のランニングコストは従来法とほぼ同様で、実験時間は約1/10に短縮可能であった。500検体を PCR-RFLP と Taq Man PCR 法の両者で検討した結果、1例の相違も認められず、再現性、信頼性は良好であった。Angiotensinogen 遺伝子のT235アリルは高血圧感受性を高めることが知られているが、我々はこれと完全な連鎖不平衡にあるT+31C多型を5,000人弱の一般集団で検討し、同多型が高血圧家族暦と関連があることを示した(Hypertension,2000,inpress)。岩手県で実施中の農村部地域住民の大規模コホート研究では、東北大学倫理委員会の承認を得て、24時間血圧変動と関連する遺伝因子、高血圧に起因する合併症と関連する遺伝因子をTaq Mac PCR法を用いて検討中であり、複数の循環器疾患候補遺伝子多型が迅速に決定されている。
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[Publications] Ishikawa K.,Katsuya T.,Higaki J.,Ogihara T.: "T+31C polymorphism of angiotensinogen gene and essential hypertension"Hypertension. (in press) (2000)
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[Publications] Higaki J.,Katsuya T.,Ogihara T.: "The deletion allele of angiotensin converting enzyme gene increases the risk of essential hypertension in Japanese males; The Suita Study"Circulation. 101. (in press) (2000)
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[Publications] Higaki J.,Ogihara T.: "The deletion allele of angiotensin converting enzyme gene increases the risk of essential hypertension in Japanese males: The Suita Study"Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20. 428-434 (1999)
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[Publications] Okamura A.,Higaki J.,Ogihara T.: "Pharmacogenetic analysis of the effect of angiotensin-converting enzyme inhibitor on restenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty"Angiology. 50. 811-822 (1999)
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[Publications] Nishii T.,Higaki J.,Ogihara T.: "Angiotensinogen gene-activating elements regulate blood pressure in the brain"Circ Res. 85. 257-263 (1999)
