2002 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
12213137
|
|---|
| Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
|---|
Principal Investigator |
葛西 宏 産業医科大学, 産業生態科学研究所, 教授 (40152615)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平野 雄 産業医科大学, 産業生態科学研究所, 助手 (40258629)
|
|---|
| Keywords | 酸化損傷 / Orf135 / 5-OH-CTP |
|---|
| Research Abstract |
ヒトMTH1、大腸菌MutTはグアニンヌクレオチドの酸化損傷である8-ヒドロキシ(OH)-dGTPを分解することによってDNA複製で起こりうるエラーを抑制する。これまで我々は、ヒトMTH1が8-OH-dGTPだけでなくアデニンヌクレオチドの酸化損傷(2-OH-dATP,8-OH-dATP,2-OH-ATP)を効率よく分解することを報告してきた。一方、大腸菌MutTは確認した限りでは8-OH-dGTPのみを特異的に分解し、酸化損傷アデニンヌクレオチドに対する分解活性は検出できなかった。このことからアデニンヌクレオチド・プールの浄化機能を大腸菌では他のタンパク質が担っている可能性があると推測し、タンパク質配列の相同性から検索を行った。今回はMTH1、MutTと相同性をもつ大腸菌Orf135タンパク質(分子量15.4KDa)のヌクレオチド分解活性の基質特異性について調べた。大腸菌ゲノムDNAからPCRによってOrf135領域を増幅し、GST-Orf135融合タンパク質の発現ベクターを構築した。大腸菌体内で発現させたGST-Orf135融合タンパク質をアフィニティーカラム、ゲルろ過によって精製した。得られた標品のGSTタグを配列特異的プロテアーゼを用いて切断し、さらにアフィニティーカラム精製によってOrf135を含む断片を得た。得られた精製標品を用いて5種の主要な酸化損傷デオキシリボヌクレオチド、5種の酸化損傷リボヌクレオチドに対する分解活性を測定したところ、リボヌクレオチドの酸化損傷、5-OH-CTPのみを特異的に分解する活性が観察された。この5-OH-CTP分解活性を酵素学的に解析した結果、分解効率(kcat/Km)が630s-1・mM-1と算出された。これは正常型CTPに対する分解活性の30倍の効率であり、5-OH-CTPがOrf135の非常によい基質であることが明らかになった。
|
Research Products
(10 results)
-
[Publications] Kamiya, H., et al.: "Induction of T->G and T->A transversions by 5-formyluracil in mammalian cells"Mutat.Res.. 513. 213-222 (2002)
-
[Publications] Tsurudome, Y., et al.: "Age-associated increase of 8-hydroxydeoxyguanosine in human colorectal tissue DNA"J.Gerontology. 56. B483-B485 (2002)
-
[Publications] Fujikawa, K., et al.: "8-Chloro-dGTP, a hypochlorous acid-modified nucleotide, is hydrolyzed by hMTH1, the human MutT homolog"FEBS Letters. 512. 149-151 (2002)
-
[Publications] Nomoto, M., et al.: "Relations between clusters of oxidatively damaged nucleotides and active or open nucleosomes in the rat Nth 1 gene"Oncogene. 21. 1649-1657 (2002)
-
[Publications] Fujikawa, K., et al.: "The oxidized pyrimidine ribonucleotide, 5-hydroxy-CTP, is hydrolyzed efficiently by the Escherichia coli recombinant Orf135 protein"DNA Repair. 1. 571-576 (2002)
-
[Publications] Yoshida, Y., et al.: "Human mitochondrial transcription factor A binds preferentially to oxidatively damaged DNA"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 295. 945-951 (2002)
-
[Publications] Shimoi K.: "Comparison between High-Performance Liquid Chromatography and Enzyme-linked Immunosorbent Assay for the Determination of 8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine in Human Urine"Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.. 11. 767-770 (2002)
-
[Publications] Mei, N., et al.: "Acute arsenite-induced 8-hydroxyguanine is associated with inhibition of repair activity in cultured human cells"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 297. 924-930 (2002)
-
[Publications] Yoshida R., et al.: "Urinary 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine Values Measured by an ELISA Correlated Well with Measurements by High-Performance Liquid Chromatography with Electrochemical Detection"Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.. 11. 1076-1081 (2002)
-
[Publications] Kasai, H.: "Oxidative DNA damage and repair. Guest editor : Miral dizdaroglu. Chemistry-based studies on oxidative DNA damage : Formation, repair, and mutagenesis"Free Radical Biology & Medicine. 33. 450-456 (2002)
