無蛋白培養下における口腔扁平上皮癌細胞の増殖機構の細胞生物学的研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12470440
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 長山 勝 徳島大学, 歯学部, 教授 (30022867)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤澤 健司 徳島大学, 歯学部, 助手 (40228979) ; 林 英司 徳島大学, 歯学部・附属病院, 講師 (50173000) ; 鎌田 伸之 徳島大学, 歯学部, 助教授 (70242211) ; 桃田 幸弘 徳島大学, 歯学部・附属病院, 助手 (00304543)
• Keywords: 扁平上皮癌 / 口腔粘膜上皮細胞 / 無蛋白培養 / サブトラクション / 増殖制御 / コトリックスメタロプロチアーゼ / 増殖因子

Research Abstract

口腔扁平上皮癌の浸潤・転移などの機構の解明のためには、正常口腔粘膜上皮細胞との詳細な比較検討が必須である。本研究においては、血清などを一切含有しない完全合成培地で培養した正常口腔粘膜上皮細胞と扁平上皮癌細胞の産生する生理活性物質を詳細に検討しその増殖機構を解明し、また同一条件で培養した正常および癌細胞で特異的に発現している遺伝子を検索しその意義を検討することを目的とする。本年度は、
1)扁平上皮癌細胞の増殖を支持する完全合成無蛋白培地PF86-1と、正常口腔粘膜上皮細胞の増殖を支持する完全合成無蛋白培地PFM-7をさらに改良し、カルシウム濃度のみを変えることで両者の培養が可能になる新規培地を作成し、検討している。
2)不死化正常上皮細胞であるHaCaT細胞の無蛋白継代培養を可能とした。種々の増殖因子の影響を検索した結果、IGF-1および2は低濃度でほぼ完全にその増殖を抑制すること、各種IGF Binding Protein(IGFBP)を産生していること、抗IGFBP抗体によって増殖促進を受けることなどを見いだしている。
3)培養正常口腔粘膜上皮細胞と扁平上皮癌細胞、および正常粘膜、前癌病変、口腔癌組織におけるテロメラーゼ活性、テロメラーゼ関連蛋白遺伝子の発現を検討し報告した。
4)扁平上皮癌細胞における接着因子E-cadherinと、転写因子snailの発現の逆相関について報告した。さらに、培地中に産生される基質分解酵素MMP-2は、snailによって誘導されることを見いだし、検討している。
5)同一患者由来の扁平上皮癌細胞と正常口腔粘膜上皮細胞を同一の無蛋白培地で培養し、サブトラクション法によって、癌において発現が低下している遺伝子CaN19を単離した。この遺伝子産物を大腸菌を用いて作成した。細胞における蛋白の発現、局在を検討するために抗体を作成中である。

Research Products

• [Publications] 上田直弘: "血管新生阻害剤による口腔扁平上皮癌の増殖抑制とその機構解析"四国歯誌. 13. 175-197 (2000)
• [Publications] Yokoyama K: "Reverse correlation of E-cadherin and snail expression in oral squamous cell carcinoma cells in vitro"Eur J Cancer,Oral Oncol. 37・1. 65-71 (2001)
• [Publications] Fujimoto R: "Expression of telomerase components in oral keratinocytes and squamous cell carcinomas"Eur.J.Cancer,Oral Oncol. 37・2. 132-140 (2001)