2000 Fiscal Year Annual Research Report

BACシステムを用いた簡便な組み換えヘルペスウイルス作成法の開発

Research Project

Project/Area Number	12556049
Research Institution	Tokyo Medical and Dental University
Principal Investigator	川口寧東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	前田健山口大学, 農学部, 助教授 (90284273) 堀本泰介東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00222282) 見上彪帯広畜産大学, 原虫病分子免疫センター, 教授 (20091506) 坂口正士 (財)化学及び血清療法研究所, 第2研究部, 上級研究員
Keywords	ヘルペスウイルス / 組み換え法 / BAC system
Research Abstract	本研究の目的はヘルペスウイルスの組み換え技術を′bacterial artificial chromosome(BAC)system"を用いて簡便な組み換え法を開発することによってヘルペスウイルスの新しいワクチン開発、遺伝子治療ベクターの開発、基礎研究を著しくスピードアップするこことにある。本年度に得られた結果は以下の通りである。ヘルペスウイルスで最も研究が進んでいる単純ヘルペスウイルス(HSV)のBAC systemを用いた組み換え法の確立を試みた。外来遺伝子の挿入によって影響がでない部位であるUL3とUL4のジャンクション部位にBACmidを挿入したトランスファープラスミドを構築した。そのトランスファープラスミドとUL3とUL4のジャンクション部位にthimidine kinase(TK)を有している組み換えHSVR7205のウイルスDNAをRSC細胞に共導入し、BuDRを用いたTK negative selectionを行った。組み換えの確認は、PCR法を用いて行った。その結果、UL3とUL4のジャンクション部位にBACmidを有した組み換えHSVの単離に成功した。現在、この組み換えウイルスのDNAが大腸菌に保持されるかを検討中である。また、マッレック病ウイルス(MDV)の有効な組み換えワクチンを開発した。MDVのゲノムにニューキャッスル病ウイルス(NDV)のF遺伝子の発現カセットを挿入した組み換えウイルスが、移行抗体を有する一般の鶏においてもMDVおよびNDVの攻撃に対し、本ワクチンを接種した鶏は発症が阻止された。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Y.Kawaguchi et al.: "Herpes simplex virus type 1 α regulatory protein ICPO functionally interacts with a cellular transcription factor BMAL 1."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98. 1877-1882 (2001)
[Publications] Y.Kawaguchi et al.: "Interaction of Epstein-Barr Virus nulear antigen leader protein ( EBNA-LP ) with HS1-associated protein X-1 : Implication of cytoplasmic function of EBNA-LP."J.Virol.. 74. 10104-10111 (2000)
[Publications] K.Sonoda et al.: "Development of effective polyvalent vaccine against both Marek's and Newcastle diseases based on recombinant Marek's disease virus type in commercial chickens with maternal antibodies."J.Virol.. 74. 3217-3226 (2000)
[Publications] E.Sato et al.,: "Efficient expression of the envelope protein of feline immunodeficiency virus in a recombinant feline herpesvirus type 1 (FHV-1) using the gC promoter of FHV-1"Virus Res.. 70. 12-23 (2000)
[Publications] Y.Nishikawa et al.: "Prevention of vertical transmission of Neospora caninum in BALB/c mice by recombinant vaccinia virus carrying NcSRS2 gene."Vaccine.. 19. 1710-1716 (2001)
[Publications] X.Xuan et al.: "Expression of Babesia equi Merozoite Antigen 1 in Insect Cells by Recombinant Baculovirus and Evaluation of Its Diagnostic Potential in an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay."J Clin Microbiol.. 39. 705-709 (2001)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

BACシステムを用いた簡便な組み換えヘルペスウイルス作成法の開発

Principal Investigator

川口 寧 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)

Research Products

[Publications] Y.Kawaguchi et al.: "Herpes simplex virus type 1 α regulatory protein ICPO functionally interacts with a cellular transcription factor BMAL 1."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98. 1877-1882 (2001)

[Publications] Y.Kawaguchi et al.: "Interaction of Epstein-Barr Virus nulear antigen leader protein ( EBNA-LP ) with HS1-associated protein X-1 : Implication of cytoplasmic function of EBNA-LP."J.Virol.. 74. 10104-10111 (2000)

[Publications] K.Sonoda et al.: "Development of effective polyvalent vaccine against both Marek's and Newcastle diseases based on recombinant Marek's disease virus type in commercial chickens with maternal antibodies."J.Virol.. 74. 3217-3226 (2000)

[Publications] E.Sato et al.,: "Efficient expression of the envelope protein of feline immunodeficiency virus in a recombinant feline herpesvirus type 1 (FHV-1) using the gC promoter of FHV-1"Virus Res.. 70. 12-23 (2000)

[Publications] Y.Nishikawa et al.: "Prevention of vertical transmission of Neospora caninum in BALB/c mice by recombinant vaccinia virus carrying NcSRS2 gene."Vaccine.. 19. 1710-1716 (2001)

[Publications] X.Xuan et al.: "Expression of Babesia equi Merozoite Antigen 1 in Insect Cells by Recombinant Baculovirus and Evaluation of Its Diagnostic Potential in an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay."J Clin Microbiol.. 39. 705-709 (2001)

川口寧東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)