2001 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトチューブリン発現酵母の構築及びチューブリンと微小管作用薬との相互作用解析
Project/Area Number |
12660092
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Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
Principal Investigator |
臼井 健郎 理化学研究所, 抗生物質研究室, 研究員 (60281648)
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Keywords | ヒトチューブリン蛋白質 / 出芽酵母 / 発現系 |
Research Abstract |
微小管作用薬の作用領域を同定する目的でチューブリン遺伝子のキメラ遺伝子の作成を試みた。現在知られている薬剤のほとんどがβチューブリンを標的としていることからヒトβチューブリン遺伝子と出芽酵母βチューブリン遺伝子(TUB2)のキメラ遺伝子の作成を行った。キメラ遺伝子作成の為、それぞれの相同な部異に制限酵素サイトを導入し、8ケ所で組み替えが可能なそれぞれのチューブリン遺伝子を作成した。また酵母への導入を確認するためにC末終止コドンの後ろにHIS3マーカーを導入し、チューブリンカセットを作成した。現在発現したチューブリンタンパク質の確認を容易にするためにHAタグの導入を行っている。 また遺伝子を導入する酵母としてゲノムのチューブリン遺伝子を破壊し、URA3マーカーのシングルコピーベクターで酵母チューブリン遺伝子を持たせたチューブリンシャッフル株を作成した。現在作成したシャッフル株にチューブリンカセットを導入し株の作成を行っており、導入確認後、5-FOAによるベクター除去を試み、ヒトチューブリン遺伝子発現酵母の作成を行う予定である。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Sano T, et al.: "Isolation of new protein phoshatase inhibitors from two cyanobacteria species, Planktothrix spp."J Nat Prod. 64. 1052-1055 (2001)
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[Publications] Sodeoka M, et al.: "Synthesis of a tetronic acid library focused on inhibitors of tyrosine and dual-specificity protein phosphatases and uits evaluation regarding VHR and cdc25B inhibition."J Med Chem.. 44. 3216-3222 (2001)
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[Publications] Usui T, et al.: "Design and synthesis of a dimeric derivative of RK-682 with increased inhibitory activity against VHR, a dual-specificity ERK phosphatase : implications for the molecular mechanism of the inhibition."Chem Biol.. 8. 1209-1220 (2001)
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[Publications] Usui T, Schiebel E.: "Regulating microtubule properties by modifying their organizing minus ends."Mol Cell. 8. 931-932 (2001)