2001 Fiscal Year Annual Research Report
内皮細胞由来過分極因子の標的イオンチャネルのクローニングとその機能的解析
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12670076
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| Research Institution | HOKKAIDO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
深尾 充宏 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助手 (10250432)
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| Keywords | 内皮由来過分極因子 / 血管内皮細胞 / 血管平滑筋細胞 / 内皮由来弛緩因子 |
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| Research Abstract |
近年、内皮由来弛緩因子の中で、NO,PGI_2とは別の血管弛緩因子、内皮由来過分極因子(EDHF)の存在が注目されている。しかしながら、現在の所、EDHFの本体、その合成酵素、ならびにEDHFの標的イオンチャネルも同定されていない。本研究では、EDHFの標的イオンチャネルを同定・クローニングし、EDHFの生理学的病態生理学的役割を検討するための基礎実験を行うことを目的とした。
方法としては、まず、EDHFの標的イオンチャネルの候補として上がっているCa^<2+>-activated K^+ channel(KCa)をクローニングし機能的解析を行うこととした。KCaはSK1,SK2,SK3,IK,BKに分類されているが、それぞれに特徴的なプライマーを作成しRT-PCRにより、KCaチャネルファミリーのcDNA断片を増幅させた。その結果、ラット脳には、SK1,SK2,SK3,BKの各遺伝子の断片が増幅された。ラット心臓にはSK3,IK,ラット腸間膜動脈にはSK3,IK,BKの増幅を確認した。次にラット腸間膜動脈に発現するSK3,IK,BKのクローニングに取り掛かった。SK3はラット心臓から作製したcDNAライブラリーのスクリーニングおよびPCR法によりクローニングした。BKはPCR法によりクローニングした。IKはクローニング中である。Sequenceの結果、従来報告されている、SK3チャネルおよびBKチャネルに類似した遺伝子がクローニングされたが、BKにおいて9塩基のinsertionを認めた。現在この遺伝子を動物細胞に発現させて、機能解析を行っている。また、SK3,BKのmutationを作製し、dominant negativeによる機能解析も進めている。また、共焦点レーザー顕微鏡を用いて、各K^+ channel局在を検討している。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Mitsuhiro Fukao: "Regulation of BK_<Ca> channels expressed in HEK293 cells by epoxyeicosatrienoic acid"Mol.Pharmacol.. 59(1). 16-23 (2001)
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[Publications] Hiroshi Tomioka: "Role of endothelial Ni^<2+>-sensitive Ca^<2+> entry pathway in regulation of EDHF in porcine coronary artery"Am.J.Physiol.. 280(2). H730-H737 (2001)
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[Publications] Hiroshi Watanabe: "Myosin light chain kinase regulates endothelial calcium entry and endothelium-dependent vasodilation"FASEB J.. 15(2). 282-284 (2001)
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[Publications] Ming-Yue Liu: "Alterations in EDHF-mediated hyperpolarization and relaxation in mesenteric arteries of female rats in long-term deficiency of oestrogen and during oestrus cycle"Br.J.Pharmacol.. 132(5). 1035-1046 (2001)
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[Publications] Mitsuhiro Fukao: "Effects of SK&F 96365 and mefenamic acid on Ca^<2+> influx in stimulated endothelial cells and on endothelium-derived hyperpolarizing factor-mediated arterial hyperpolarization and relaxation"J.Cardiovasc.Pharmacol.. 38(1). 130-140 (2001)
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[Publications] Mitsuhiro Fukao: "Endothelium-derived Hyperpolarizing Factor"Essential role of estrogen in the EDHF-mediated responses of mesenteric arteries from middle aged female rats. 502 (2001)
