ヒトBリンパ腫のspontaneous apoptosisの分子機序の解明

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670168
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 阿部 正文 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (00045783)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 橋本 優子 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (60305357) ; 田崎 和洋 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (70244382) ; 小野 伸高 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (80233584)
• Keywords: apoptosis / Bcl-2 / Bcl-X_L / 遺伝子導入 / caspase

Research Abstract

研究代表者が樹立したヒトバーキット型リンパ腫培養株HBL-9はin vitroでspontaneous apoptosisを起こす特異な性質を有している。研究代表者らはHBL-9培養株におけるspontaneous apoptosisの細胞内シグナル伝達経路に関して(1)capsase-2、capase-3、caspase-7、caspase-8等の複数のcaspasesの活性化が関与していること、(2)これらcaspasesの基質としてPARP、lamin B、ICADが同定されたこと、(3)capsase-2、caspase-3、caspase-7、caspase-8に対するそれぞれのcaspase inhibitorではapoptosisは抑制されないが、Z-Asp-CH2-DCBやZ-VAD-FMKのcaspase inhibitorでapoptosisの抑制がみられることなどを明らかにしてきた。さらに、HBL-9培養株は免疫組織化学染色法およびWestern blot法にてapoptosisを抑制するBcl-2、Bcl-X_Lおよびapoptosisを促進するBax、Badを発現していないことを蛋白レベルで明らかにした。このため現在HBL-9培養株にBcl-2あるいはBcl-X_L遺伝子を導入してspontaneous apoptosisを抑制できるかどうかを検討している。すなわち、Bcl-2発現plasmid(pCAGGS-hbcl-2;大阪大辻本賀英教授から分与)あるいはBcl-X_L発現plasmid(pCAGGS-hbcl-X_L;大阪大辻本賀英教授から分与)とG418耐性plasmidを混合したDNA溶液をGene pulser IIで導入した。現在G418耐性コロニーを複数個採取して、apoptosisが抑制されているかどうか検討中である。