多核巨細胞形成の誘導に関わるウイルス糖蛋白の構造変化の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670280
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 鶴留 雅人 三重大学, 医学部, 助教授 (50159042)
• Keywords: パラミクソウイルス科 / シミアンウイルス5 / 多核巨細胞 / F蛋白 / 構造変化 / モノクローナル抗体 / エンドサイトーシス / 宿主細胞因子

Research Abstract

既に報告したように、SV5(WR株)のF蛋白(WR-F)の22番目のLeuをProに変えた変異F蛋白(L22P)はBHK細胞やHeLa細胞においてHN蛋白非依存性の多核巨細胞誘導能を示す。
さらに、L22PはエンドサイトーシスされるがWR-Fはされないこと、またL22PのF1が分解して36kDaの産物を生ずることも明らかになっている。
[結果]
1.L22PのF1の細胞質内領域を延長したキメラ蛋白もHN蛋白非依存性の多核巨細胞誘導能を持つが、このキメラ蛋白発現細胞にも36kDaの蛋白が出現したことから、36kDaの蛋白はL22PのF1のN末側に由来するものと考えられた。
2.L22PのF1のC末側に由来する15kDaの蛋白を検出した。またL22Pのエンドサイトーシスは、コレステロール依存性であることが判明した。
3.WR-F発現細胞を47℃で熱処理すると、HN蛋白非依存性の多核巨細胞が誘導され、WR-Fがエンドサイトーシスされることを見い出した。この処理によりWR-Fに抗L22P抗体(mAb 21-1)のエピトープが露出した。
[考察]
WR-Fは熱処理によりpostfusion conformationへと構造変化することが示唆された、同時にエンドサイトーシス、mAb21-1のエピトープの露出が起こることから、多核巨細胞膜内に挿入されているfusion peptideがコレステロールと結合し、これがエンドサイトーシスのシグナルになるものと推論した。またこの構造変化はmAb 21-1のエピトープの存在するhead regionに生じるものと考えられる。L22Pではこのエピトープが解裂前から露出しているが、このためにpostfusion conformationへと構造変化を起こしやすく、37℃でもHN蛋白非依存性の多核巨細胞誘導能を示すものと結論した。

Research Products

• [Publications] Yoko Okamoto: "Expression and regulation of 4F2hc and hLAT1 in human trophoblasts"American Journal of Physiology Cell Physiology. Vol.282. C196-C204 (2002)
• [Publications] Noriki Miyamoto: "Human osteosarcoma-derived cell lines produce soluble factor(s) that induces differentiation of blood monocytes to osteoclast-like cells"International Immunopharmacology. Vol.2. 25-38 (2002)
• [Publications] Morihiro Ito: "Up-regulated expression of a novel gene in activated human peripheral blood mononuclear cells that is a truncated paralog of the human system L-amino acid transporter 1"Inernational Journal of Biochemistry and Cell Biology. Vol.34. 1152-1163 (2002)