2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12670293
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
中山 俊憲 千葉大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (50237468)
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| Keywords | パイエル板 / TCR / 遺伝子再構成 / RAG2ノックイン / GFP |
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| Research Abstract |
この申請研究では、T細胞の分化段階で最も重要なイベントである、遺伝子再構成に注目しRAG-2遺伝子にGreenFluorescenceProtein(GFP)をノックインしたマウスを樹立した。脾臓細胞の一部とパイエル板の細胞の一部のT細胞にGFPの発現がみられ、これらの組織内でT細胞にRAG2遺伝子が発現していることが予想された。この細胞が胸腺外分化の証拠となるかどうかに注目して解析し、今年度の研究で次の3点が明らかになった。
1)パイエル板にあるThy1陽性、GFP陽性の細胞を調整し、遺伝子再構成がおこっている事実があるかどうか、TCRαβ鎖の遺伝子再構成をPCRで調べたところ、確かに環状DNAが検出された。この頻度は、胸腺細胞の頻度とほぼ同じであった。
2)GFP/RAG-2ノックインマウスのパイエル版の中にあるGFP陽性の細胞では、遺伝子再構成が起こっている。これが、TCRの刺激によって誘導できるかどうかを調べる目的で,GFP陽性の細胞をソーティングし、in vitroでIL-2,IL-7GM-CSFを加え、抗TCR抗体で刺激培養を行った。現在の所、誘導の検出はできていないが、今後、条件を変えて(抗原ペプチドで刺激、抗TCR抗体の濃度を変える、コレセプターの刺激も加える)検討する。
3)アデノウイルスベクターを利用したT細胞への遺伝子導入の系を樹立することを目的としているが、今回はアデノウイルスレセプターのTgマウスのT細胞を用いている。このマウスのナイーブT細胞では、GFPを組み込んだベクターを用いて約70%の感染が確かめられた。今後、パイエル版の細胞へのGM-CSFの遺伝子導入の実験条件を検討していく。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Yoshikatsu Kaneko: "Augmentation of Vα14NKT cell-mediated cytotoxicity by IL-4 in an autocrine mechanisn resulting in the development of concanavalin A-induced hepatitis."The Journal of Experimental Medicine . 191. 105-114 (2000)
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[Publications] Katsura Ito: "Involvement of decidual Vα14 NKT cells in abortion."Proceedings of the National Academy of Sciences. 97. 740-744 (2000)
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[Publications] Koji Tokoyoda: "Synergism between the calmodulin-binding domain and the auto-inhibitory domain on calcineurin is essential for the induction of their phosphatase activity."The Journal of Biological Chemistry. 275. 11728-11734 (2000)
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[Publications] Y.Ikehara: "CD4^+ Vα14 NKT cells are essential for acceptance of intrahepatic rat islet xenografts in mice treated with anti-CD4 antibody."Journal of Clinical Investigation. 105. 1761-1767 (2000)
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[Publications] Masakatsu Yamashita: "TCR-induced calcineurin activation regulates Th2 cell development by modifying the IL-4 receptor signaling complex."The Journal of Experimental Medicine . 191. 1869-1879 (2000)
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[Publications] J.L.Matsuda: "Tracking the response of NKT cells to a glycolipid antigen using CD1d tetramers : The response to α-galactosylceramide is dynamic and highly compartmentalized."The Journal of Experimental Medicine. 192. 741-754 (2000)
