アクリルアミドの作用機構および毒性予防に関する細胞生物学的研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670335
• Research Institution: University of Occupational and Environmental Health
• Principal Investigator: 伊規須 英輝 産業医科大学, 産業生態科学研究所, 教授 (60108686)
• Keywords: アクリルアミド / 前初期遺伝子 / c-Fos / c-Jun / MAPK

Research Abstract

アクリルアミドは、ヒト・動物いずれでも中枢・末梢神経障害を引き起こしうる。そこで、ヒト神経芽細胞株SH-SY5Y細胞を用いて、アクリルアミドの細胞毒性、前初期遺伝子c-fos、c-jun発現及びMAPキナーゼ活性に及ぼす影響を検討した。まず、細胞毒性評価を血清入りDMEM/F12混合培地を用い、1×10^4個の細胞に対し、アクリルアミド濃度0、100、250、500μMで、24、48、72、96時間暴露後にWST-8アッセイにて行った。その結果、暴露24時間後では有意な生存率の低下は見られなかったが、48-72時間後、量依存的な生存率の低下が認められた。次に、1×10^5個の細胞を一晩のserum starvation後、新しいDMEM/F12培地に変えて37℃でアクリルアミドを1時間暴露、総RNAをTrizol試薬を用いて分離し、RT-PCR法によってc-fos、c-jun遺伝子発現量を測定(G3PDH遺伝子発現量で補正)したところ、c-fos遺伝子発現量には有意な増加は認められなかったが、c-jun遺伝子発現量は250、500μM暴露において有意に増加した。一方、MAPキナーゼは、特異的抗体を用いてWestern blottingにて評価した。リン酸化されたERK(extracellular signal-regulated protein kinase)、JNK(c-Jun N-terminal kinase)、p38、および総(リン酸化+非リン酸化)MAPキナーゼ蛋白量いずれにも変化を認めなかった。

Research Products

• [Publications] Wispriyono B., Matsuoka M., Igisu H.: "Effects of pentachlorophenol and tetrachlorohydroquinone on mitogen-activated protein kinase pathway sin jurkat T cells"Environmental Health Perspectives. 110・2. 139-143 (2002)
• [Publications] Matsuoka M., Igisu H.: "Effects of heavy metals on mitogen-activated protein kinase pathways"Environmental Health and Preventive Medicine. 6・4. 210-217 (2002)
• [Publications] Matsuoka M., Igisu H.: "Cadmium induces phosphorylation of p53 at serine 15 in MCF-7 cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. 282・5. 1120-1125 (2001)
• [Publications] Yu Z., Matsuoka M., Wispriyono B., Iryo Y., Isigu H.: "Activation of mitogen-activated protein kinases by tributyltin in CCRF-CEM cells : Role of intracellular Ca^<2+>"Toxicology and Applied Pharmacology. 168・3. 200-207 (2000)
• [Publications] Kinoshita Y., Matsumura H., Igisu H., Yokota A.: "Brain of rats intoxicated with acrylamide : observation with 4.7 tesla magnetic resonance"Archives of Toxicology. 74・8. 487-489 (2000)
• [Publications] Iryo Y., Matsuoka M., Igisu H.: "Suppression of pentylenetetrazol-induced seizures and c-fos expression in mouse brain by L-carnitine"Journal of Occupational Health. 42・3. 119-123 (2000)
• [Publications] 荒記 俊一編 伊規須 英輝, 松岡 雅人: "中毒学 -基礎・臨床・社会医学-"朝倉書店. (2002)