酵母two-hybrid法によるヘリコバクター胃上皮相互作用の解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670449
• Research Institution: HOKKAIDO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 杉山 敏郎 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (00196768)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 守内 哲也 北海道大学, 遺伝子病研究所, 教授 (20174394) ; 浅香 正博 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (10113507)
• Keywords: H.pylori / 外膜蛋白 / 接着 / 4型分泌機構

Research Abstract

本研究ではH.pyloriとヒト胃粘腹上皮細胞の接着後の胃上皮細胞におこるアポトーシス関連蛋白遺伝子群およびNF-kBの活性化に関わる蛋白遺伝子群を酵母ハイブリット法を用いて、迅速かつ容易に同定し、H.pyloriと胃上皮細胞の相互作用の分子機構を明らかにする.接着に関連する32種のH.pylori外膜蛋白遺伝子をPGBT9発現ベクターに組み込み、酵母内で発現させ、さらに、これにpGAD424発現ベクターにヒト胃上皮cDNAライブラリーを導入して、H.pylori外膜蛋白あるいはcagPAIと結合する胃上皮蛋白遺伝子cDNAをスクリーニングした.この結果、H.pyloriと胃上皮細胞の接着に関わる可能性が高い45種のH.pylori遺伝子とcagPAI上にあるcagG遺伝子を選別した.アポトーシス関連蛋白遺伝子群の同定は約600種のヒト胃上皮cDNAを打ち込んだDNAアレイを用い、H.pyloriと胃癌細胞株MKN45を共培養した後、MKN45からmRNAを抽出しスクリーニングした.15種のアポトーシス関連蛋白遺伝子の発現が増強し、そのH.pylori責任遺伝子を同定中にあるが、いまだ解析は終了できていない.我が国での検討では疾患を問わず感染者の96%はcagPAI陽性菌でcagPAI欠損株感染者は4%にすぎない.cagPAI欠損株の大半がcagG欠損であり、本菌は胃癌細胞株からのIL-8誘導能が低下していた.CagG遺伝子は4型分泌機構の構成遺伝子ではなく、その機能は明らかではないが、胃癌細胞株への接着が弱く、接着に関わる分子と推定される.最近、cagGノックアウト菌を作成し、詳細な機能解析を進行させている.

Research Products

• [Publications] Higashi H, Sugiyama T et al.: "SHP-2 tyrosine phosphatase as an intracellular target of H.pylori CagA protein"Science. 295. 683-686 (2002)
• [Publications] Mizushima T, Sugiyama T et al.: "Decreased adherence of cagG deleted Helicobacter pylori to gastric epithelial cells in Japanese clinical isolates"Helicobacter. 7. in press (2002)
• [Publications] Mizushima T, Sugiyama T et al.: "Clinical relevance of the babA2 genotype of Helicobacter pylori in Japanese clinical isolates"J Clin Microbil. 39. 2463-2465 (2001)
• [Publications] Sugiyama T et al.: "Attributable risk of H.pylori in peptic ulcer diseases : Does the declining prevalence of infection in general population explain the increasing frequency of non-H.pylori ulcer?"Dig Dis Sci. 46. 307-310 (2001)
• [Publications] Sugiyama T et al.: "AP12-MALT1 chimeric transcript is a predictive marker for the responsiveness of H.pylori eradication treatment in low-grade gastric MALT lymphoma"Gastroenterology. 120. 1884-1885 (2001)
• [Publications] Kawahara T, Sugiyama T et al.: "Type I Helicobacter pylori lipopolysaccharides stimulates Toll-like receptor 4 and activates mitogen oxidase 1 in gastric pit cells"Infect Immune. 69. 4382-4389 (2001)