培養肝細胞を用いたC型肝炎ウイルス増殖過程の解析と抗ウイルス薬開発への応用

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670477
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 垣内 雅彦 三重大学, 医学部, 講師 (70214244)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小原 道法 東京都臨床医学総合研究所, 感染生体防御研究部門, 室長(研究職) (10250218) ; 渡邉 省三 三重大学, 保健管理センター, 教授 (20134934) ; 生駒 次朗 三重大学, 医学部附属病院, 助手 (80283521)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / 培養細胞 / 電子顕微鏡 / 免疫電子顕微鏡 / 免疫組織化学 / ウイルスベクター / ラクトフェリン / 鉄製限食

Research Abstract

HCVの培養細胞系では、ヒト肝細胞とHepG2細胞を紫外線照射にて不活化したセンダイウイルスを用いて融合し、ヒト肝細胞由来IMY細胞を樹立しました。この細胞にC型慢性肝炎患者血清を添加するとHCV(10^4copies/ml程度)の培養が可能となりました。IMY細胞はNativeなHCVの増殖が可能な細胞です。この細胞にHCV全長遺伝子(type 1b)のcDNAを遺伝子工学的手法を用い、効率よくHCV(10^<10>copies/ml以上)を複製することができるようになりました。このシステムを用い、HCVの増殖は細胞質内で行われ、滑面小包体内へHCV粒子が出芽し、細胞外へと排出されることを電子顕微鏡下に明らかとし、更に培養細胞の上清中に多数のHCVが存在することを免疫電子顕微鏡下にとらえた。この研究結果を第51回と第52回米国肝臓学会に発表した。現在、分担研究者小原道法先生がNature Medicineに投稿中である。更に牛ラクロフェリンがGenotype 1b,高ウイルス量のC型慢性肝炎患者のウイルス量を低下させることを明らかとし、第52回米国肝臓学会に発表し、American Journal of Gastroenterology,97(3),766-777,2002.に報告しました。さらに鉄制限食がC型慢性肝炎の治療に有効であることを明らかにし、Hepato-Gastroenterology,49(44):537-539,2002に報告し、第6回日本肝臓学会大会のシンポジウム3(肝臓学会・消化器病学会合同)難治性C型慢性肝炎の治療法update.に「難治性C型慢性肝炎に対するUDCA併用鉄制限食療法とラクトフェリン療法」という演題で発表しました。

Research Products

• [Publications] Motoh lwasa, Masahiko Kaito, Jiro Ikoma, Shozo Watanabe et al.: "Dietary Iron Restriction Improves Aminotransferase Levels in Chronic Hepatitis C Patients"Hepato-Gastroenterology. 49(44). 537-839 (2002)
• [Publications] Jiro Ikoma, Masahiko Kaito, Shozo Watanabe, et al.: "Early Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma Using a Sensitive Assay for Serum Des-γ-Carboxy Prothrombin : a Prospective Study"Hepato-Gastroenterology. 49(43). 235-238 (2002)
• [Publications] Motoh Iwasa, Masagiko Kaito, Jiro Ikoma, Shozo Watanabe et al.: "Lactoferrin inhibits hepatitis C virus (HCV) viremia in chronic hepatitis C patients with a high viral load and HCV genotype 1b"American Journal of Gastroenterology. 97(3). 766-767 (2002)
• [Publications] Naoki Fujita, Masahiko Kaito Jiro Ikoma, Shozo Watanabe, et al.: "Non-Immune Complexed HCV RNA Titer in Serum as a Predictor of Interferon Response in Patients with Chronic Hepatitis C. Gastroenterology"American Journal of Gastroenterology. 98(3)(In press). (2003)
• [Publications] 垣内雅彦: "IMY細胞上清中のHCV粒子に関する免疫電子顕微鏡的研究"西部肝臓フォーラム 01'記録集編集 原田 尚/谷川久一. 122-137 (2002)
• [Publications] 垣内雅彦, 岩佐元雄, 足立幸彦他: "難治性C型慢性肝炎に対するUDCA併用鉄制限食療法とラクトフェリン療法"消化器科 特集II 「難治性C型慢性肝炎の治療法」. (In press).
• [Publications] Masahiko Kaito, Naoki Fujita, Jiro Ikoma, Shozo Watanabe, et al.: "Hepatitis C Virus Particles Detected by Immunogold Electron Microscopy"Science, Technology and Education of Microscopy, an Overview. A. Mendez Vilas 特集(In press). (2003)