プロトンポンプβサブユニット結合蛋白の同定による胃酸分泌機構の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670521
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 斉藤 寿仁 東京女子医科大学, 医学部・内科, 講師 (50246609)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福嶋 康之 東京大学, 医学部・内科, 医員 ; 高橋 春樹 東京女子医科大学, 医学部・内科, 助手 (00246612) ; 大塚 洋子 東京女子医科大学, 医学部・内科, 助手 (20307606)
• Keywords: プロトンポンプ / βサブユニット / GST融合蛋白質

Research Abstract

プロトンポンプH^+K^+ATPaseはα、βサブユニットからなる2量体でありβサブユニットはプロトンポンプの細胞内局在を決定する役割を果たすと考えられている。βサブユニットのN末端から30数アミノ酸までの細胞内に存在する部分に結合する未知蛋白質の同定を目的として、N末端から30数アミノ酸部分に対応するペプチドを合成した。合成した蛋白をアフィゲルビーズに付着させてカラムを作成した。カラムにラット胃粘膜ライセートをアプライし、付着したライセート中の蛋白を溶出し電気泳動で同定した。今後の予定としては泳動で得たゲルのバンドを切り出して蛋白のペプチドシークエンスを行いアミノ酸配列を同定する。その後すでに作成したβサブユニットの細胞内部分を含んだGST融合蛋白質を用いてクローニングし発現ベクターをλgt11でcDNAを作成する。GST融合蛋白をプローブとして発現クローニングを行った後に泳動で得て同定される蛋白質の機能を解析するため、抗体による免疫染色、免疫沈降法などを用いて壁細胞での局在を明らかにした上でCHO細胞などの培養細胞系のcDNAを導入発現させ機能を検討する。胃酸分泌のための刺激の無い状態での休止期のプロトンポンプを細胞内に固定する機構、刺激時にその固定を解除するメカニズムに関与する蛋白質を胃粘膜ライセートから同定することを期待している。現在使用されているプロトンポンプ阻害薬剤数種類において薬効の差異が報告されるようになった。休止状態のプロトンポンプに対する感受性に着目した報告もありβサブユニットとの相互作用を有する蛋白質の機能の解析は重要と思われる。

Research Products

• [Publications] 斉藤寿仁: "プロトンポンプαサブユニットN端のリン酸化についての検討"Therapeutic Research. 22. 12-16 (2001)
• [Publications] Otsuka Hiroko: "Long-lasting binding of IT-066 to the human histamine H_2 receptor"Digestive Diseases and Sciences. 45. 186-192 (2000)
• [Publications] 斉藤寿仁: "各種PPIの投与初期における胃内pHの変動"胃分泌研究会誌. 32. 9-12 (2000)
• [Publications] SAITOH Toshihito: "INTRAGASTRIC PH AND CIRCADIAN RHYTHM"ASIAN MEDICAL JOURNAL. 43・8. 353-360 (2000)
• [Publications] Saitoh Toshihito: "Effects of Nalpha-methyl-histamine on human H_2 receptor"Gut. 93(印刷中). (2001)