アルツハイマー病脳に沈着するアミロイドβ蛋白のN末端切断酵素(BACE)の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670590
• Research Institution: University of Tsukuba
• Principal Investigator: 玉岡 晃 筑波大学, 臨床医学系, 助教授 (50192183)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 望月 昭英 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (40301080)
• Keywords: アルツハイマー病 / アミロイドβ蛋白 / βアミロイド前駆体蛋白 / BACE / ELISA

Research Abstract

本研究では、アルツハイマー病(Alzheimer's disease;AD)脳に広範かつ大量に沈着するアミロイドβ蛋白(amy1oid β protein;Aβ)の産生が促進されているか否かを検証するために、AβのN末端を切断する酵素として最近クローニングされたBACE(beta-site APP-cleaving enzyme)に焦点を絞って、免疫組織化学的、免疫化学的、生化学的、分子生物学的解析を行なうことをその目的としている。
本年度はまず抗BACE抗体の作製を行なった。BACEのアミノ酸配列よりN末端(22-33)、中間部(46-56)とC末端(485-501)の3箇所を選び、各々の合成ペプチド(ペプチド1:TQHGIRLPLRSG、ペプチド2:ETDEEPEEPGR、ペプチド3:LRQQHDDFADDISLLK)を作製した。ペプチド1はC末端側に、ペプチド2と3はN末端側にシステイン残基を介して担体蛋白(KLH)と結合させた後、アジュバントとともに家兎に免疫し、抗BACE抗体を作製し、現在、EIA法にて抗体の力価の上昇を確認しつつある状況である。
これと併行して、抗BACE抗体を用いてAD脳におけるBACEの量的・質的変化を解析する際に脳に沈着Aβ量との相関を検討する計画であるため、ELISA(サンドイッチ法)によって、AD脳に沈着したAβを定量した。AβのN末端部に対する抗体BNT77(合成Aβ11-28ペプチドに対するモノクローナル抗体)を一次抗体として96穴マイクロプレートに固定し、AβのC末端認識抗体BC05(合成Aβ35-43ペプチドに対するモノクローナル抗体)やBA27(合成Aβ 1-40ペプチドに対するモノクローナル抗体)を西洋ワサビパーオキシダーゼ(HRP)で標識したものを二次抗体として、脳の蟻酸抽出画分に含まれるAβ42(43)とAβ40を識別定量した。

Research Products

• [Publications] Sayoko Matsuno : "A case with myasthenia gravis (MG) emerging after splenectomy for idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)"J Med. (in press).
• [Publications] Takahiko Tokuda : "Plasma levels of amyloid βproteins did not differ between snbjects with and without taking statins."Ann Neurol.. (in press).
• [Publications] Kazuhiro Ishii : "Distinguishable effects of presenilin-1 and APP 717 mutations on amyloid plaque deposition"Neurobiol Aging. (in press).
• [Publications] Hoshi K: "Cessation of cerebral hemorrhage recurrence associated with corticosteroid treatment"Amyloid . 7. 284-288 (2000)
• [Publications] Cavani S: "Plasma levels of amyloid beta 40 and 42 are independent from Apo E gemtype and mental retardation"Am J Med Genet. 95. 224-228 (2000)
• [Publications] 渡辺雅彦: "橋梗塞で発症した多発椎骨動脈瘤"神経内科. 53[Suppl・2]. 286-287 (2000)
• [Publications] Tamaoka A: "Increased amyloid β protein in the skin of patients with amyotrophic lateral sclerosis"J Neurology. 247. 633-635 (2000)
• [Publications] 河野豊: "成人期に発症した睡眠時の律動性運動障害(rhythmic movement disorder of sleep)の一例."運動障害. 10(1). 25-29 (2000)
• [Publications] Tamaoka A: "Apolipoprotein E allele-dependent antioxidant activity in brains with Alzheimer's disease"Neurology. 54. 2319-2321 (2000)
• [Publications] Minoru Yasuda : "Novel presenilin-l mutation with widespread cortical amyloid deposition but limited cerebral"J Neurol Neurosurg Psychiatry . 68. 220-223 (2000)
• [Publications] Mochizuki A: "A beta 42-positive non-pyramidal neurons around amyloid plaques in Alzheimer's disease"Lancet . 355. 42-43 (2000)
• [Publications] Harada H : "Clinical improvement following interferon-alpha alone as an initial treatment in chronic"Muscle Nerve. 23. 295-296 (2000)
• [Publications] 玉岡晃: "髄液・血液検査"脳の科学(2000年臨時増刊号). 22. 185-189 (2000)
• [Publications] 玉岡晃: "Apo E の抗酸化作用からみた Alzheimer病発症誘導機構"最新医学. 55(7). 95-103 (2000)
• [Publications] 玉岡晃: "脳出血と髄液中のcystatin C"臨床検査. 44(13). 1668-1670 (2000)
• [Publications] 玉岡晃: "アルツハイマー病"スズケンメディカル. 4(2)(発表予定). (2001)
• [Publications] 玉岡晃: "アルツハイマー病"スズケンファーマ. 4(2)(発表予定). (2001)
• [Publications] 玉岡晃: "アポ Eisoformと脳内過酸化脂質"Dementia Japan. 15(1)(発表予定). (2001)
• [Publications] 玉岡晃: "Annual Review神経2001"(Alzheimer病とrsecretase)中外医学社. 14 (2001)
• [Publications] 玉岡晃: "検査値のみかた(改訂2版)"(家族性アルツハイマー病)中外医学社. 11 (2000)
• [Publications] 白岩伸子: "検査値のみかた(改訂2版)"(エトコンドソア脳筋症)中外医学社. 8 (2000)
• [Publications] 玉岡晃: "臨床医学のMinimum Essential"金原出版株式会社. 17 (2000)