新生ケモカイン"WECHE"の造血・発生における機能解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12670997
• Research Institution: University of Tsukuba
• Principal Investigator: 大根田 修 筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (30311872)
• Keywords: ケモカイン / 血管内皮細胞 / Flk-1 / WECHE(CXCL15) / トランスジェニックマウス

Research Abstract

本研究は、胎生10.5日目背側大動脈由来血管内皮細胞株から単離したケモカイン"WECHE(CXCL15)"の血管内皮細胞に対する機能解析を目的に行った。以前、WECHEが血管内皮前駆細胞の増殖を濃度体存的に抑制することをOP9ストローマ細胞との共培養系にて明らかにした。
生体内の血管内皮細胞分化・増殖にたいするWECHE役割を明らかにすることを目的に、WECHEトランスジェニックマウス作製のための構築作製を行った。血管内皮前駆細胞特異的にWECHEを発現させるために、血管内皮細胞特異的に発現するFlk-1プロモーターを用いて実験を行った。血管内皮細胞におけるFlk-1-GFPトランスジェニックマウスを作製し、解析を行った。Flk-1-GFP細胞は、蛍光顕微鏡および蛍光励起細胞分離装置(FACS)により、胎生10.5目由来卵黄嚢および胎児本体にその発現を確認することができた。
FACSを用いてCD45陰性GFP陽性細胞を単離し、OP9ストローマ細胞との共培養を行った。CD45陰性GFP陰性の細胞を共培養したものと比較して、GFP陽性細胞は明らかにOP9細胞上に血管内皮細胞クラスターを高頻度に形成することが明らかになった。また、用いたFlk-1プロモーター領域は血管内皮細胞特異的にその発現が制御されることが報告されていたが、今回行った実験では、わずかに血球紬胞もOP9細胞上で分化・増殖することが分かった。
現在、WECHEトランネジェニックマウス作製に向けてFlk-1プロモーターにWECHEをつないだ構築を作製中である。

Research Products

• [Publications] Arai, F., Ohneda, O.et al.: "Mesenchymal stem cells in perichondrium express activated leukocyte cell adhesion molecule and participate in bone marrow formation"Journal of Experimental Medicine. 195. 1549-1563 (2002)