2001 Fiscal Year Annual Research Report

アデノ随伴ウィルスベクターを用いた血友病Aに対する遺伝子治療の基礎的検討

Research Project

Project/Area Number	12671003
Research Institution	Jichi Medical School
Principal Investigator	水上浩明自治医科大学, 医学部, 助手 (20311938)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	窓岩清治自治医科大学, 医学部, 講師 (70296119)
Keywords	アデノ随伴ウイルス / AAVベクター / 血友病A / 凝固第VIII因子 / プロモーター / 血清型 / 骨格筋 / 肝臓
Research Abstract	ヒト第VIII因子を搭載するベクター構築に先立ち、骨格筋に対するAAVベクター投与法の基礎実験として、至適プロモーター及び血清型の検討を行った。肝臓に対してはCMV、CAG、PGK、EF-1α等のプロモーターを用い、マウス由来のエリスロポエチン(Epo)cDNAを搭載したベクターを構築・作製した。以上のAAVベクターを経門脈的に投与し、遺伝子発現効率を血清エリスロポエチン濃度及び血液学的指標を用いて系時的に比較した。その結果、CAG、CMV、PGK、EF-1αの順に強い発現が得られた。至適と考えられるCAGプロモーターでマウスEpoを発現するユニットを用いてAAVの1型から5型までの血清型の違いによる遺伝子発現を比較検討した。その結果、5型を用いた場合に最も高い発現が見られた。骨格筋に対しては実績のあるCMVプロモーターを使用し骨格筋内への注入による血清型の比較を行ったところ、1型が最も高く、5型がこれに次ぎ、それ以外が2型とほぼ同程度とする結果が得られた。以上の結果は長期にわたる観察によっても同じ傾向を示した。以上の結果をふまえてヒト凝固第VIII因子遺伝子を搭載したAAVベクターの構築を行った。第VIII因子遺伝子を重鎖と軽鎖を二つのベクターに分けて標的細胞に共感染させることで発現を目指している。肝臓に対してはCAGプロモーターと5型キャプシドを用いて、また、骨格筋に対してはCMVプロモーターと1型キャプシドを用いて各々作製した。このストラテジーの有用性はin vitroの実験系で確認が出来たため、in vivoで検討を行うべくベクターの大量作製を行った。凝固第VIII因子ノックアウトマウスも既に入手できており、現在注入に向けた準備を行っている。今後は注入と共に経過観察、治療効果の確認を行い、有効であれば更に大型の動物における治療実験を指向する予定である。

Research Products

(14 results)

All Other

All Publications (14 results)

[Publications] Hasumi Y, et al.: "Soluble FLT-1 Expression Suppresses Carcinomatous Ascites in Nude Mice Bearing Ovarian Cancer"Cancer Research. (in press).
[Publications] Shimpo M, et al.: "AAV-Mediated VEGF Gene Transter into Skeletal Muscle Stimulates Angiogenesis and Improves Blood Flow"Cardiovascular Research. (in press).
[Publications] Saga Y, et al.: "Expression of HGF/NK4 in Ovarian Cancer Cells Suppresses Intraperitoneal Dissemination"Gene Therapy. 8. 1450-1455 (2001)
[Publications] Xin K, et al.: "A Novel Recombinant AAV Vaccine Induces a long-Term Humoral Response to HIV"Human Gene Therapy. 12. 1047-1061 (2001)
[Publications] Muramatsu M, et al.: "Reversible Integration of the Dominant Negative Retinoid Receptor Gene for ex vivo Expansion of Hematopoietic"Biochem and Biophys Res Commun. 285. 891-896 (2001)
[Publications] Kanazawa T et al.: "γ-Rays Enhance rAAV-mediated Transgene Expression and Cytocidal Effect of AAV-HSVtk/gancyclovir on Cancer Cells"Cancer Gene Therapy. 8. 99-106 (2001)
[Publications] Okada T et al.: "Development and Characterization of an Antisense-Mediated Prepackaging cell Line for AAV vector production"Biochem and Biophys Res Commun. 288. 62-68 (2001)
[Publications] Kogure K et al.: "Targeted Integration of Foreign DNA into a Defined Locus on Chromosome 19 in K562 cells using AAV-Derived components"Int. J. of Hematology. 73. 469-475 (2001)
[Publications] Handa A et al.: "AAV-3-based vectors Transduce Haematopoietic cells not Susceptible to Transduction with AAV-2-based Vectors"J. of Gen Virology. 81. 2077-2084 (2000)
[Publications] Shen Y et al.: "Triple Transduction with AAV Vectors Expressing Tyrosine Hydroxylase, Aromatic-L-Amino Acid Decarboxylase, and・・・"Human Gene Therapy. 11. 1509-1519 (2000)
[Publications] Madoiwa S et al.: "Auto antibody against prothrambin Aberrantly Alters the proenzyme to Facilitate Formation of a Complex with・・・"Blood. 97. 3783-3789 (2001)
[Publications] Matsuda KM et al.: "A Novel Strategy for the Tumor Angiogeneses-targeted Gene Therapy : Generation of Angiostatin from・・・"Cancer Gene Therapy. 7. 589-596 (2000)
[Publications] Okada T et al.: "Methods in Enzymology, Vol.346"Academic Press. 16 (2002)
[Publications] Ozawa K et al.: "Progress in Gene Therapy-basic and clinical frontiers"VSP. 18 (2000)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

アデノ随伴ウィルスベクターを用いた血友病Aに対する遺伝子治療の基礎的検討

Principal Investigator

水上 浩明 自治医科大学, 医学部, 助手 (20311938)

Research Products

[Publications] Hasumi Y, et al.: "Soluble FLT-1 Expression Suppresses Carcinomatous Ascites in Nude Mice Bearing Ovarian Cancer"Cancer Research. (in press).

[Publications] Shimpo M, et al.: "AAV-Mediated VEGF Gene Transter into Skeletal Muscle Stimulates Angiogenesis and Improves Blood Flow"Cardiovascular Research. (in press).

[Publications] Saga Y, et al.: "Expression of HGF/NK4 in Ovarian Cancer Cells Suppresses Intraperitoneal Dissemination"Gene Therapy. 8. 1450-1455 (2001)

[Publications] Xin K, et al.: "A Novel Recombinant AAV Vaccine Induces a long-Term Humoral Response to HIV"Human Gene Therapy. 12. 1047-1061 (2001)

[Publications] Muramatsu M, et al.: "Reversible Integration of the Dominant Negative Retinoid Receptor Gene for ex vivo Expansion of Hematopoietic"Biochem and Biophys Res Commun. 285. 891-896 (2001)

[Publications] Kanazawa T et al.: "γ-Rays Enhance rAAV-mediated Transgene Expression and Cytocidal Effect of AAV-HSVtk/gancyclovir on Cancer Cells"Cancer Gene Therapy. 8. 99-106 (2001)

[Publications] Okada T et al.: "Development and Characterization of an Antisense-Mediated Prepackaging cell Line for AAV vector production"Biochem and Biophys Res Commun. 288. 62-68 (2001)

[Publications] Kogure K et al.: "Targeted Integration of Foreign DNA into a Defined Locus on Chromosome 19 in K562 cells using AAV-Derived components"Int. J. of Hematology. 73. 469-475 (2001)

[Publications] Handa A et al.: "AAV-3-based vectors Transduce Haematopoietic cells not Susceptible to Transduction with AAV-2-based Vectors"J. of Gen Virology. 81. 2077-2084 (2000)

[Publications] Shen Y et al.: "Triple Transduction with AAV Vectors Expressing Tyrosine Hydroxylase, Aromatic-L-Amino Acid Decarboxylase, and・・・"Human Gene Therapy. 11. 1509-1519 (2000)

[Publications] Madoiwa S et al.: "Auto antibody against prothrambin Aberrantly Alters the proenzyme to Facilitate Formation of a Complex with・・・"Blood. 97. 3783-3789 (2001)

[Publications] Matsuda KM et al.: "A Novel Strategy for the Tumor Angiogeneses-targeted Gene Therapy : Generation of Angiostatin from・・・"Cancer Gene Therapy. 7. 589-596 (2000)

[Publications] Okada T et al.: "Methods in Enzymology, Vol.346"Academic Press. 16 (2002)

[Publications] Ozawa K et al.: "Progress in Gene Therapy-basic and clinical frontiers"VSP. 18 (2000)

水上浩明自治医科大学, 医学部, 助手 (20311938)