2001 Fiscal Year Annual Research Report
発作性夜間血色素尿症幹細胞の増殖優位性に関わる遺伝子群の検索
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12671012
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| Research Institution | Kinki University |
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Principal Investigator |
金丸 昭久 近畿大学, 医学部, 教授 (70068534)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
嶋田 高広 近畿大学, 医学部・附属病院, 助手 (90319674)
松田 光弘 近畿大学, 医学部, 講師 (90258004)
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| Keywords | 発作性夜間血色素尿症 / PNHクローン / cDNAサブトラクション / 増殖優位性獲得 / クローニング / PIG-A変異細胞 / SMART-PCR法 / cDNAマクロアレイ |
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| Research Abstract |
本研究の目的はPNH患者のPNHクローンに発現し、健常人PIG-A変異細胞には発現していないPNHクローン特異的遺伝子群をクローニングすることにより、PNHクローンの増殖優位性獲得に関与する遺伝子群の解明を行うことにある。
前段階の実験としてPNH患者末梢血中のCD59^-クローンとPNH患者末梢血中のCD59^+クローン間のcDNAサブトラクションを行った。あるPNH患者より採取した好中球からマグネットビーズと抗CD59抗体を用いてCD59^+分画とCD59^-分画の分離を行ったところCD59^-分画≧93%の精製が可能であった。こうして得られたPNH患者好中球のCD59^-分画とCD59^+分画からtotal-RNAを抽出し、Chenchikらが開発したSMART-PCR法を用いて、それぞれのtotal-RNAからcDNAを合成し、Diatchenkoらのプロトコールに従いsuppression subtractive hybridizationを行った。また別の方法としてcDNAマクロアレイを用いて両者間で差次的に発現する遺伝子群のスクリーニングを行っている。cDNAマクロアレイのためのcDNAプローブとしては既述したSMART-PCR法で増幅したcDNAライブラリを用いた。CD59^-好中球で発現量の増加している候補遺伝子が5種類、CD59^+好中球で発現量の増加している候補遺伝子が7種類検出され、現在4例のPNH患者のCD59^-好中球とCD59^+好中球を分離後、半定量的RT-PCRを用いて検討中である。
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